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蛋白表达与纯化服务
原核蛋白表达与纯化服务
服务简介：
目前，原核蛋白表达系统是最成熟可靠的蛋白表达系统，适合于快速表达纯化各种不同来源的蛋白。大量制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列生物医学领域的研究。
摩尔生物公司通过筛选测试表达载体与表达菌株、优化表达体系及诱导表达条件、摸索包涵体复性条件等，极大程度地解决了蛋白难以可溶表达纯化等难题。摩尔公司向广大客户提供专业的蛋白表达纯化外包服务，包括表达质粒构建、原核蛋白表达纯化、真核蛋白表达纯化、以及蛋白纯化后除菌去内毒素分装、纯度检测等服务，并提供各种检测报告。客户的需求是公司发展的首要前提，我们会全心全意的完成客户订单任务。
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主要步骤
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内容
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交付内容
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交付时间
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目标基因
全基因合成
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1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列；
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化； 3. 合成设计好的基因序列。 |
目的基因 （在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告
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≤ 150bp 10个工作日左右
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150-2000bp 12-17 个工作日左右
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2000-4000bp 18-22个工作日起
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> 4000bp 协商
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目标基因
亚克隆
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1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒；
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上； 3. 测序验证构建质粒的准确性； 4. 可提供表达载体。 |
正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告
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有模板： 2-3周
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无模板： 4周
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E. coli 表达菌株转化及筛选
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1. 扩增并抽提构建好的表达质粒；
2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中； 3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株； 4. 可提供表达菌株： JM109、BL21 (DE3)、Rosetta(DE3)等。 |
重组质粒的表达菌株及表达检测报告
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2-3周
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目标蛋白
表达及纯化
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1. 对时间、温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，诱导表达目标蛋白；
2. 摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和、离子交换、疏水及凝胶过滤等层析方法纯化表达的重组蛋白； 3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（Tag），再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体需 加入合适的蛋白酶切位点）； 4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量；
5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性(可选)。 |
纯化好的目标蛋白1mg以上及纯化报告，可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达95%以上。
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客户提供诱导条件：2-3周
若未提供摸索条件，需要额外增加1周左右时间（不含western blot的时间）
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目标蛋白
再加工及详细检测
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1. 对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究；
2. 内毒素去除、除菌、冻干等进一步加工； 3. 通过HPLC、质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。 |
加工后的终产品及相关实验和检测报告
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2-3周
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大规模制备
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按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。
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合格的目标蛋白及服务报告
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协商
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真核蛋白表达与纯化服务
由于应用于该领域的重组蛋白基本上均需要翻译后修饰，以获得与天然分子相同的生物活性，而真核细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能，因此很多客户选择真核蛋白表达系统，表达高质量的重组蛋白。
本公司为您提供毫克级的真核细胞表达与纯化服务 ，帮助您快速获得满意的实验结果。
本公司为您提供毫克级的真核细胞表达与纯化服务 ，帮助您快速获得满意的实验结果。
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毕赤酵母（P. pastoris）系统表达与纯化服务
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主要步骤
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内容
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交付内容
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交付时间
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目标基因
全基因合成
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1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列；
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子的优化； 3. 合成设计好的基因序列。 |
目的基因 （在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告
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2kb 以下，2周左右
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目标基因
亚克隆
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1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒；
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上； 3. 测序验证构建质粒的准确性； 4. 可提供表达载体（pPIC9K系列为主）。 |
正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告
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有模板： 2-3周
无模板： 4周
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毕赤酵母表达菌株电转化和筛选
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1. 酶切线性化表达质粒；
2. 将表达质粒通过电转化到高效的毕赤酵母表达菌株中；
3. 通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆；
4. 进行高拷贝菌株筛选；
5.可提供表达菌株：X33、GS115、SMD1168。
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PCR阳性克隆和PCR结果报告以及高拷贝筛选报告
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2-4周
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毕赤酵母表达菌株筛选
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1. 将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增，然后换至BMMY培养基中，并加入甲醇诱导表达目标蛋白；
2. SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达； 3. 如果培养上清中检测不到表达，则通过将上清浓缩20倍作用再检测，或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达（客户需要提供相关抗体）。 |
阳性克隆菌株及表达筛选结果报告
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2周
（不含western blot时间）
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毕赤酵母表达菌株表达优化
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1. 挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选，并对其中表达最好菌株优化表达条件；
2. 对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基、菌体密度、甲醇浓度、诱导时间等），提高目标蛋白的表达量。 |
三个阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告
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2周
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目标蛋白
表达及纯化
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1. 摇瓶培养1L重组酵母菌，诱导表达目标蛋白；
2. 通过亲和、离子交换、疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白； 3. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量； 4. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。 |
纯化好的目标蛋白1mg以上及纯化报告，可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白， 纯度最高可达90%以上。
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2-3周
（不含western blot时间）
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目标蛋白
再加工及详细检测
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1. 内毒素去除、除菌、冻干等进一步加工；
2. 通过HPLC、质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。 |
加工后的终产品及相关实验和检测报告
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2周
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大规模制备
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按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。
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合格的目标蛋白及服务报告
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协商
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分子生物学技术服务
分子生物学技术是科学研究领域有力的工具，也是现代药物研究的主要驱动力之一。尽管分子生物学技术被普遍应用，但操作十分枯燥，结果相对不稳定，极大地耗费了科研人员的精力及时间。摩尔生物为客户提供经济可靠的分子生物学专业外包服务，主要包括基因克隆、质粒DNA制备以及定点突变等服务。我们的服务包含了从鉴定、克隆到功能研究的整个基因分析的范围，旨在为广大科研人员节省宝贵的时间与精力。
分子生物学服务内容
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服务编号
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服务名称
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内容说明
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价格
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周期
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MRFZ-001
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RNA提取
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新鲜组织、血液、细胞
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￥/样品
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1周
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MRFZ-002
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基因组DNA提取
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新鲜组织、血液、细胞
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￥/样品
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1周
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MRFZ-003
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质粒提取
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菌种
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5ug：￥/样品
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1周
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50ug：￥/样品
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100ug：￥/样品
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MRFZ-004
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基因克隆
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PCR及重组载体构建
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有模板，<500bp，
￥/基因
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有模板
2-3周 |
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有模板，500-1500bp，
￥/基因
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有模板，1500-2500bp，￥/基因
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无模板，<500bp，
￥/基因
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无模板
4周
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无模板， 500-1000bp，￥/基因
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MRFZ-005
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逆转录
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cDNA文库的构建
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￥/样品
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1周
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MRFZ-006
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PCR定点突变
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基因序列分析
构建质粒
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<1000bp，￥/点
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2-3周
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1000-1500bp，询价
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MRFZ-007
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Western Blot检测
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检测目的蛋白表达情况
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￥/目的蛋白·膜
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1-2周
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注：上表中周期为单个样品的服务周期，具体周期视样品个数而定。