杜济良，赵洪亮，薛冲，任敏，刘志敏
军事医学科学院生物工程研究所，北京100071
〔摘要」
目的:探索定位于细胞质、内质网膜及内质网腔中的分子伴侣及其组合对于带有不同信号肽的胞外β-1,3-葡聚糖酶(EXG1)在巴斯德毕赤酵母GS200中表达水平的影响。
方法:通过融合PCR技术分别构建带有酵母α交配因子引导肽序列(αMF) ,酵母α交配因子信号肽序列(αPre)和重链结合蛋白(Bip)信号肽序列的报告蛋白EXG1的表达质粒pPIC9-EXG1，同时构建分子伴侣基因及其组合的表达质粒pBLArg-IV，然后将2种重组质粒共转化至毕赤酵母宿王菌GS200，转化子经筛选获得共表达菌株，通过测定EXG1酶活来评价分子伴侣与信号肽对其表达水平的影响。
结果:细胞质及内质网膜上的分子伴侣Sec61α,Sec61β及胞质中的分子伴侣Ydjl ,Ssal ,Hsp104及其组合对各种信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平没有显著影响。然而，内质网腔中的分子伴侣Bip,EroI,PDI与HacI组合能显著提高报告蛋白EXG1的表达水平，其中，以αMF或αPre作为信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平分别提高了2.6倍和3.8倍，以Bip信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平提高了20% -45 %，而对于以EXG1自身信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平:是有显著影响。
结论:在酵母表达体系中，内质网腔中的分子伴侣是报告蛋白EXG1表达水平的重要影响因素，但分子伴侣对于信号肽的选择性还须进一步证明。
〔关键词〕分子伴侣;信号肽;蛋白表达;巴斯德毕赤酵母
[中图分类号]Q78; Q75[文献标识码]A[文章编号]1009-0002(2013)01-0019-06
