4-羟基苯乙酸一3-羟化酶A重组表达菌株的构建及其对羟基酪醇的生物转化研究*
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(1河南农业大学生命科学学院郑州450002 2上海医药工业研究院上海200040)
(3商丘师范学院生命科学学院商丘476000)
摘要目的:构建表达4-羟基苯乙酸一3-羟化酶A (4-hydroxyphenylacetate -3 -hydroxylase A , HHA )
的重组菌株，进而以酪醇为底物，利用重组菌株转化生产羟基酪醇。方法:选择大肠杆菌BL21
( DE3)为模板来扩增HH}基因，经酶切后连接到表达载体pET-28a中，获得重组表达载体
pET28 a-HHA，将重组载体转化到感受态细胞BL21(DE3)，在重组菌液中加入适量酪醇，利用胞内
的重组酶对酪醇加羟基合成羟基酪醇，细胞离心后，分别采用薄层层析法和气质联用法检测上清
液中羟基酪醇的转化结果。结果:IPTG诱导表达后，经SDS-PAGE分析获得分子质量分别为
58. 8kDa和18. SkDa的两条蛋白质条带。薄层层析法和气质联用法均检测到催化产物羟基酪醇
的生成。结论:成功构建了表达HHA的重组菌株，该菌株可有效将酪醇转化为羟基酪醇。
关键词大肠杆菌 酪醇 羟基酪醇 生物转化
