周勇徐刚杨立荣吴坚平**
(浙江大学化学工程与生物工程学院杭州310027
摘要枯草芽袍杆菌具有良好的安全性和优异的外分泌能力，是目前常用的脂肪酶异源分泌表
达体系。在枯草体系中如何提高脂肪酶分泌量是目前的研究热点。该体系中信号肽与目的基因
不匹配和目标蛋白总表达量不高是导致脂肪酶Lips分泌表达效果较差的重要原因。针对这些问
题，依据信号肽结构特征的不同(正电荷与疏水氨基酸个数的差异)对枯草芽袍杆菌体系中Sec
和Tat这两个主要分泌途径的信号肽进行了筛选，结果显示Tat途径中的phoD信号肽分泌效果明
显优于其他信号肽。在此基拙上，通过替换使用诱导型表达载体、突变优化phoD信号肽，并考察
了表达条件的影响，显著提高了脂肪酶Lips的分泌表达量，发酵液中转醋酶活达到62. 07U/L，占
总酶活的62. 30%，较原始分泌表达体系的分泌量提高了13. 7倍。
关键词 脂肪酶 信号肽 筛选 分泌表达
中图分类号p814
