徐志博，林振泉，陈涛*
(天津大学化工学院教育部系统生物工程重点实验室，天津300072)
摘要:利用PCR技术从枯草芽抱杆菌(Bacillus subtalas 168)中扩增出3. 5 kb的核黄素操纵子，将其
分别连接到不同拷贝数的表达载体pSC101,p15 A,pBR322，得到重组载体pSC101-BSrib, p15A-
BSrib和pB R322-B Srib，并分另!)转化到大肠杆菌(Escherachaa cola I}-12 MG1655 )。对含有核黄素操
纵子的重组大肠杆菌进行摇瓶发酵，结果表明其核黄素合成能力随着质粒拷贝数的增加而增强。
随后对E. cola I}-12 MG1655 ECX3菌株的诱导剂IPTG浓度和发酵温度进行了优化。结果显示，
0. 1 mmol " L - ` IPTG和42℃为核黄素生产的最适宜条件。在此条件下，菌株ECX3在LB培养基中
核黄素产量达到251.4 mg"L-`。最后，通过无痕基因操作技术，减弱了工程菌株ECX3核黄素激
酶/黄素腺喋吟二核普酸氨酞转移酶( rib月的表达以减少核黄素转化为FMN和FAD，摇瓶中工程
菌株ECX4的核黄素产量提高到292.3 mg"L-`o
关键词:核黄素;大肠杆菌;枯草芽抱杆菌;rib操纵子;核黄素激酶/黄素腺喋吟二核普酸氨酞转移酶
中图分类号:Q815文献标志码:A文章编号:1004 - 9533 ( 2016 ) 02 - 0085 - 06
