产胸苷磷酸化酶菌株初筛方法的建立及其应用

 摘要 建立了一种快速简便地筛选高产胸普磷酸化酶菌株的初筛方法及其在紫外诱变育种中的应用。结果显示，在液体培养基中，添加25 mmol/ L胸普不会影响菌体生长且菌体中的胸普磷酸化酶能催化胸普生成胸腺喀咤，在同等浓度下产物胸腺喀咤ODzyo远大于胸普ODzyo,，从而导致发酵液ODzyo显著升高，据此建立产胸普磷酸化酶短乳杆菌的初筛方法。在此基拙上结合紫外诱变条件的优化，确定初次紫外照射时间为20 s，停止5 min后再照射10 s,15 s,20 s，控制紫外致死率在80%左右，以此条件构建突变文库。通过初筛和复筛确定突变株EBz} , EAQz酶活分别达到1.025 U/mg湿菌体和0. 916 U/mg湿菌体，较初始菌株提高了50%和35%，且具有良好的遗传稳定性。