王玲玲1 夏苗苗2 董会娜2 朱蓓薇1 张大伟1，2
（1. 大连工业大学食品学院，大连 116034 ；2. 中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308）
摘 要 ：
维生素 B12（VB12/ 钴胺素）具有多种生理学功能，广泛应用于制药、食品等行业。脱氮假单胞菌是维生素 B12 常用工业菌株之一。通过筛选高表达启动子来过表达 VB12 合成途径基因，能有效提高菌株的 VB12 生产能力。通过对脱氮假单胞菌中某些编码热激蛋白和分子伴侣基因前含启动子在内的非编码序列用启动子在线预测软件进行分析，选取 PibpA、PcbpA、PdnaJ、PhtpG、 Pdnak、PgrpE 的非编码区与编码绿色荧光蛋白的 GFP 报告基因相连，通过酶标仪检测 GFP 的荧光信号值，对编码热激蛋白和分子伴侣基因前的非编码区所含有的启动子的表达强度进行评估，以获得高表达的启动子对 VB12 合成途径的基因进行过表达。结果表明，含有启动子 Pdnak 的非编码区，其表达的 GFP 荧光值最高。进而构建强启动子 Pdnak 与维生素 B12 合成途径基因 cobA 的过表达重组菌，发酵数据表明，与对照菌株相比重组菌株维生素 B12 产量提高 21.5 mg/L。筛选高表达启动子用于维生素 B12 合成途径关键基因的表达，是一种有效的提高维生素 B12 产量的方法。
关键词 ： 脱氮假单胞菌 ；强启动子 ；cobA ；维生素 B12 ；Gibson assembly DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0010
