徐美娟 1 ，张显 1 ，饶志明 1 ，杨娟 1 ，窦文芳 2 ，金坚 2 ，许正宏 2 1
江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122 2 江南大学医药学院，无锡 214122
摘 要: N-乙酰鸟氨酸转氨酶 (EC 2.6.1.11，ACOAT) 是钝齿棒杆菌 Corynebacterium crenatum 精氨酸合成途径中的第 4 个酶，催化底物 N-乙酰谷氨酸半醛生成产物 N-乙酰鸟氨酸。为研究 N-乙酰鸟氨酸转氨酶在钝齿棒杆菌中精氨酸合成 中的作用，考察其酶学性质，对培养基成分和发酵过程工艺条件的优化提高精氨酸产量提供依据。从精氨酸高产菌株 钝齿棒杆菌 SYPA 5-5 染色体扩增获得 ACOAT 编码基因 argD，全长 1 176 bp，编码 390 个氨基酸，在 Escherichia coli BL21(DE3) 及 C. crenatum SYPA 中成功表达。采用 Ni 柱亲和层析纯化后获得的重组蛋白比酶活达 108.2 U/g，对其部 分酶学性质进行初步研究。构建重组钝齿棒杆菌 C. crenatum SYPA (pJCtac-CcargD)，加强精氨酸合成途径 ACOAT 蛋 白表达量，对重组菌产精氨酸进行初步发酵分析。多次发酵结果表明重组钝齿棒杆菌与出发菌株相比胞内 ACOAT 酶活 得以增强；重组菌 CCD1 精氨酸平均产量为 39.7 g/L，产酸提高 14.7％。结果还表明在重组菌发酵精氨酸的同时不仅 ACOAT 得到了加强表达，同时还提高了重组菌在发酵过程中菌体自身的氧利用率。 关键词: 钝齿棒杆菌，L-精氨酸，乙酰鸟氨酸转氨酶，酶学性质，发酵
