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阿魏酸酯酶A的基因克隆与表达及其水解产物的纯化

日期:2014-07-28     浏览:308    下载:0     体积:795.72K     评论:0    


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 摘 要: 为在毕赤酵母中表达来源于米曲霉 Aspergillus oryzae 的 A 型阿魏酸酯酶并研究其水解功能,探讨大孔树脂对其水解产物阿魏酸的纯化条件及纯化效果,以米曲霉 A. oryzae CICC 40186 总 RNA 为模板,通过 RT-PCR
技术克隆出了米曲霉阿魏酸酯酶 A (AorFaeA) 成熟肽的编码基因 AorfaeA,并借助 pPIC9K 质粒实现了其在毕赤酵母 GS115 中的异源表达。SDS-PAGE 分析结果显示纯化后的重组阿魏酸酯酶 (reAorFaeA) 为单一条带,其表观分子质量约 39.0 kDa。以阿魏酸甲酯为底物,经高效液相色谱法测得该酶的最高酶活为 58.35 U/mg。利用reAorFaeA 和木聚糖酶复合酶水解去淀粉麦麸制备阿魏酸,用大孔树脂纯化小麦麸皮阿魏酸粗提液,所测树脂中HPD-300 型大孔树脂的吸附量和解吸率较高,以 50%的乙醇为洗脱液,当流速为 1.0 mL/min 时洗脱效果较好。
在该纯化条件下,阿魏酸的回收率为 92%,质量分数由原材料中的 0.13%富集提高到 10.55%。这些研究为阿魏酸的酶法“绿色生产”及应用奠定了坚实的理论基础。
 
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