共表达 ＰＤＩ１、ＭＤＨ１和 ＨＡＣ１基因对重组毕赤 酵母分泌表达葡糖氧化酶的影响
张文玉 魏东升 钱江潮 （华东理工大学生物反应器国家重点实验室 上海 ２００２３７）
摘要
葡糖氧化酶（ＧＯＤ）可催化葡萄糖生成过氧化氢和葡萄糖酸，在工业上被广泛应用。在构 建的一株整合多拷贝 ＧＯＤ基因且含有 ＨＡＣ１表达单元的重组毕赤酵母 Ｇ／ＧＭＨ１的基础上，共表 达分子伴侣二硫键异构酶基因 ＰＤＩ１和苹果酸脱氢酶基因 ＭＤＨ１，考察 ＰＤＩ１、ＭＤＨ１基因与 ＨＡＣ１ 共表达后对 ＧＯＤ分泌表达的影响。这些基因共表达后对重组菌的生长无明显影响。ＰＤＩ１和 ＭＤＨ１分别与 ＨＡＣ１共表达后，重组菌 Ｇ／ＧＭＨ１ＰＤＩ１和 Ｇ／ＧＭＨ１ＭＤＨ１的胞外 ＧＯＤ产量达到 １１７３１．９Ｕ／ｇＤＣＷ和 １１０４７．６Ｕ／ｇＤＣＷ，比出发菌提高了 １７．３％和 １０．４％，前者达到了目前所报 道摇瓶培养的最高单位菌体酶活水平。而三基因共表达重组菌 Ｇ／ＧＭＨ１ＰＤＩ１ＭＤＨ１的 ＧＯＤ产 量略有下降。在所构建的菌株中，ＧＯＤ基因的转录水平仅在 Ｇ／ＧＭＨ１ＰＤＩ１ＭＤＨ１中略有提高， 与酶产量的提高无直接关系。与出发菌相比，共表达基因的转录水平在新构建的菌中有不同程 度的升高，说明这些基因被成功转录。ＰＤＩ１和 ＭＤＨ１基因转录在 Ｇ／ＧＭＨ１ＰＤＩ１和 Ｇ／ＧＭＨ１ ＭＤＨ１中分别被上调，可能与 ＧＯＤ产量提高有关。虽然 ＧＯＤ、ＨＡＣ１、ＰＤＩ１和 ＭＤＨ１基因在 Ｇ／ ＧＭＨ１ＰＤＩ１ＭＤＨ１中均被上调，但并未促进酶产量的提高。
关键词 重组毕赤酵母 葡糖氧化酶 ＨＡＣ１基因 ＰＤＩ１基因 ＭＤＨ１基因
