Amphibacillusｘylanus谷氨酸脱氢酶基因 工程菌培养条件优化

Amphibacillusｘylanus谷氨酸脱氢酶基因 工程菌培养条件优化 '
陈子晗 周海胜 尹新坚 吴坚平 杨立荣'' （浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所 杭州 310027）
摘要 首先构建了 5株表达 NADH依赖型谷氨酸脱氢酶的大肠杆菌基因工程菌，获得来源于Amphibacillusxylanus的谷氨酸脱氢酶 AxyGDH。其最适温度为 60C、最适 pH为 8.0，该条件下比酶活达到（903.1±24.6）U／mg，酶活半衰期为 167h。其次，确定了表达 AxyGDH的大肠杆菌基因工程菌 E.coliBL21（DE3）／pET28a（+）AxyGDH的产酶条件：诱导剂 IPTG浓度为 0.7mmol／L、诱导温度为 25C；优化后的培养基组成为：甘油 11.3g／L，酵母粉 16.3g／L，MgSO4·7H2O0.62g／L，NaCl0.5g／L，Na2HPO4·12H2O17.1g／L，KH2PO43g／L，NH4Cl1.5g／L。最后，在 10L发酵罐中控制比生长速率为 0.2hr1进行补料分批发酵，所得 AxyGDH的发酵酶活为（9066±45）U／ml，是 LB摇瓶发酵酶活的 51.1倍，为谷氨酸脱氢酶的低成本生产奠定了基础。

关键词 谷氨酸脱氢酶 异源表达 比酶活 稳定性 发酵