基因重组法构建表柔红霉素高产菌株
陈继业１ ，黄 佳１，２ ，李伟平１，３ ，李继安１ ，陈代杰１ ，朱宝泉１ ，邵 雷１
（１上海医药工业研究院创新药物与制药工艺国家重点实验室（筹），上海 ２００４３７；
２ 中国药科大学生命科学与技术学院，南京 ２１０００９；
３河南工业大学生物工程学院，郑州 ４５０００１）
摘 要 表柔红霉素是抗肿瘤药表阿霉素的半合成前体。通过中断 ｄｎｍＶ基因，并将酮基还原酶 ａｖｅＢⅥ基因导入，可 以将柔红霉素产生菌改造成表柔红霉素产生菌。本研究通过此方法得到了产表柔红霉素的基因工程菌 ｍＨＪ０２３０１，在此 基础上构建柔红霉素生物合成基因 ｄｎｒＵ的同框敲除质粒 ｐＹＧ１１１６，将其转入原有的表柔红霉素产生菌 ｍＨＪ０２３０１，通过 同源重组双交换的方法，将 ｄｎｒＵ基因内部编码 １５３个氨基酸的序列敲除。从而得到 ｄｎｒＵ基因失活的突变株 ｍＹＧ１１１６Ｅ， 发酵验证表明该突变株表柔红霉素发酵单位比出发菌株提高了约 ４０％。
关键词 表柔红霉素；同源重组；基因置换；基因敲除
