吴果果１ 宋淑婷１ 岳 荣１ 张 晶１ 关 莹１ 王 癑１ 刘宝爱２
吕学敏２ 魏建军２ 张会图１
（１天津科技大学生物工程学院 天津 ３００４５７ ２天津市新星兽药厂 天津 ３００４０２）
摘要 为进一步简化放线菌的遗传操作流程，缩短重组菌株的筛选周期，在对杀真菌链霉菌
（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓＡＴＣＣ２１０１３）进行遗传操作的过程中引入了一个反向筛选标记基因———
尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因（ｕｐｐ）。并通过原始菌株中ｕｐｐ基因的敲除，以及带有ｕｐｐ基因的自杀型基因敲除载体的构建，开发了一套完整的针对杀真菌链霉菌的无痕敲除系统。通过载体的整合、二次交换及反向筛选实现了杀真菌链霉菌基因组中ＳｔｒＲ基因的快速无痕敲除。ｕｐｐ反向筛选标记基因的引入使得链霉菌重组菌株的平均筛选周期缩短了２周左右，并进一步减少了假阳性重组菌株出现的概率，可实现放线菌中目的基因的连续无痕敲除，因此值得进一步推广和应用。
关键词 杀真菌链霉菌 反向筛选标记 尿嘧啶磷酸核糖转移酶 基因敲除
