重组亚甲基四氢叶酸还原酶代谢工程菌发酵工艺的优化

邵飞 ，卞筱泓　， 阙哲夫 ，许激扬　，尤 晓清，赵玉成 ，刘 为营（中国药科大学生物化学教研室，南京２１０００９）

摘要 ：
目的 优化重组亚甲基 四 氢叶酸还原酶代谢 工程 细 菌株 的发酵工 艺， 以提 高此 菌株 中　一５。甲基四 氢叶酸的 累积量 。

方法 通过 单因 素实验和正 交实验 研 究此 菌株 的最优 发 酵工艺。 结果 此 菌株 的 最优 发 酵工 艺为 ： 蔗糖 为 ３％ ， 酵母 浸粉 为

１． ０％ ，无机盐为 ＮａＣ１・Ｋ２ＨＰＯ４－ＭｇＳＯ４（１． ２６％ ：０． ４２％ ： ０． ０２％ ） ，磷酸二 氢铵 为 １． ０％ ，接种量 为 ５％ ，初 始 ｐＨ 为 ７． ５，诱导 时机 为 ２． ５　ｈ，诱导 剂浓度为 １． ４　ｍｍｏｌ・Ｌ～，诱 导 温度 为 ３７ ℃ ， 诱导 时间为 ６　ｈ，诱 导 剂添加 次数 为 ２ 次。 优化 后 与优化 前相 比 ，此菌株 的细 菌生长 量提 高 了 ３６． ４％ ， 亚 甲 基 四 氢 叶 酸还 原 酶 比 活 力 提 高 了 ４６． ８％ ，　－５一甲 基 四 氢 叶 酸 的 累 积 量 提 高 了６６． １％ 。

结论 本 实验 为 此 菌株 的发 酵罐 中试放 大提供 了 实验依据。

关键 词 ：亚 甲基四 氢叶酸还原 酶 ；代 谢工程 ；　．５一甲基 四氢叶酸 ；发 酵工艺