近日,中国科学院微生物所娄春波课题组与清华大学,特拉维夫大学合作开发了利用CRISPR-Cas9系统一步靶向克隆上百kb的基因簇片段的方法。该方法利用RNA-介导的CRISPR-Cas9核酸内切酶精确的切割所需克隆的任意基因簇片段两侧,并且通过Gibson组装方法将切割下来的大片段与目标载体进行连接,达到一步克隆的目的。利用该方法我们成功克隆了不同尺度(50-150 kb)的大肠杆菌基因组片段,并在其他细菌(枯草芽孢杆菌,链霉菌)中成功克隆了芽孢、金霉素、杰多霉素等生物合成基因簇。
该技术已于2015年9月1日在Nature Communications 杂志在线发表,文章第一作者是清华大学博士生姜文君,微生物所赵学金博士做出了前期领先的重要贡献,并已经与合作单位联合申请了国际专利及国内专利。
图一 CATCH技术示意图
图二 应用CATCH技术克隆芽孢(a),杰多霉素(b),金霉素(c)生物合成基因簇鉴定结果
(微生物所供稿)