代谢工程在以生物法为基础的生物能源、化工品、材料的生产中发挥着巨大的作用，同时该项技术也涉及到多个基因片段的整合与删除来更改细胞内的代谢流。目前，现有的染色体整合/删除技术如RecA同源重组、λ-Red重组、CRISPR/Cas9等虽然都已发展相对成熟，但是这些技术在大片段的整合方法，不仅需要较长的同源臂，并且整合的效率都相对较低。
近日，台湾国立清华大学，逢甲大学，国立成功大学等三校合作在期刊《Biotechnology and Bioengineering》发表了一篇提高大片段在大肠杆菌中整合的文章。该文章在之前多篇大肠杆菌CRISPR/Cas9文章的基础上，专门针对大片段整合效率较低的问题展开研究工作。该研究系统结合CRISPR/Cas9系统、LacZ蓝白斑筛选、λ-Red增强修复等三个技术，将大片段（7Kb）的定点整合效率提高到了60%以上，并且将同源臂的长度能够限制在50bp左右。该套改进系统将能够简化合成代谢途径在大肠杆菌中的整合，同时也将更多的用于菌株的优化以及代谢工程与合成生物学中。
图一 改进型CRISPR/Cas9系统示意图
图二 蓝白斑筛选中不同片段大小的整合
