DSM专利WO2017060195-A1报道了改造工程酵母以改善己糖,戊糖和乙酸的共同利用,提高乙醇产量的方法。通过将酿酒酵母内源氧化戊糖途径NADP+依赖的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶替换为NAD+依赖型增加胞内NADH水平,并引入大肠杆菌来源乙酸回用途径使得工程酵母厌氧发酵乙酸消耗量增加44%,乙醇产量增加3%。
敲除酿酒酵母天然NADP+依赖的D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶,引入NAD+依赖性的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、萄糖脱氢酶可以增加胞质NADH水平,这可以导致甘油产率的提高,这在葡萄酒工业中是有利的;可以导致乙酸水平的降低,增加乙醇产量,这对生物燃料生产是有利的;NADH作为胞质辅因子,产生的NADH可用于生产真核细胞中的任何发酵产物。
将酿酒酵母内源NAD+依赖葡萄糖-6-磷酸脱氢酶ZWF1替换为Haloferax volcanii来源NADP+依赖的azf,内源gnd1以Methylobacillus flagellates来源的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶GndA替换,敲除内原NAD+依赖性甘油3-磷酸脱氢酶GPD1和GPD2,并引入大肠杆菌来源的酰基化乙醛脱氢酶eutE获得菌株gpdIA gpd2::eutE gnd2A gnd1::gndA zwfl::azf。在添加20 g/L葡萄糖和3 g/L乙酸的培养基中厌氧发酵,单位生物量的乙酸盐消耗量44%,乙醇产量增加3%。