在编码ERG5和ERG6的基因中引入双敲除，使得胆甾-5,7,24(25)-三烯醇和酵母甾醇的比例达到7：1甚至更少，尽可能减少麦角甾醇的产量，这有利于生产胆固醇，而胆固醇有利于三烯甘油脂的合成。在适于甾醇生产的条件下培养上述改造过的酵母细胞，甾醇混合物中存在的酵母甾醇的量约为3％或更少，酵母甾醇的合成不利于胆甾-5,7,24(25)-三烯醇的合成。
失活內源酰基转移酶ARE2或ARE1、ARE2，表达具有甾醇Δ24-还原酶活性的EC1.3.1.72的异源酶，提高三烯甘油脂的合成量，从而提高7-DHC的产量，7-DHC与酵母甾醇的比例达到87%：2%。7-DHC经光化学转化为维生素D3原，再经异构化转化为维生素D3。
