D-乳酸可以通过化学合成法和微生物发酵法获得。化学合成法存在环境污染、成本昂贵、光学纯度较低等问题,很难满足应用要求;微生物合成光学纯D-乳酸的潜力引起生物工程领域的广泛关注,但已有生物合成研究依然存在生产成本偏高、光学纯度较低等问题。青岛能源所生物基材料组群赵广研究组近期成功利用克雷伯氏菌实现了100%光学纯D-乳酸的合成,产量和转化率等指标均处于国际先进水平。
克雷伯氏菌具有可利用碳源广、生长迅速等优点,是1,3-丙二醇等产品的主要生产菌株,很少有研究关注该菌在乳酸合成方面的潜力。赵广研究组在前期研究中发现该菌可以利用甘油大量合成D-乳酸,进而以克雷伯氏菌生产光学纯D-乳酸为目标展开了深入研究。经过系统的代谢改造和调控、及发酵条件优化等措施,首次实现了100%光学纯D-乳酸的生物合成。研究发现,工程克雷伯氏菌不仅可以利用常用碳源葡萄糖和纯甘油,还可以高效利用生物柴油副产物甘油、生物质热解回收甘油等粗甘油,以及木糖、阿拉伯糖等五碳糖,扩大了底物利用范围;在阻断或抑制了1,3-丙二醇、2,3-丁二醇等副产物的合成后,D-乳酸合成效率大幅度提升;可以在有氧条件下发酵生产,有效规避了乳酸合成必须严格厌氧发酵的缺点。目前,已成功完成了500L发酵罐的放大试验,工程克雷伯氏菌的光学纯D-乳酸产量达到150g/L,底物转化率0.91g/g,生产效率大于3g/L/h。相关研究建立了利用不同来源的廉价底物生产高光学纯D-乳酸的生物合成技术,可以有效降低生产成本,应用潜力巨大,为D-乳酸发酵技术的产业化应用奠定了基础。相关成果发表在Bioresource Technology、Microbial Cell Factories等重要期刊,申请发明专利4项,其中一项已获得授权。
相关系列研究获得了中科院百人计划项目、山东省自然科学基金、山东省博士后专项资金等的资助。(文/图 冯新军 赵广)
相关成果发表
1. Xinjun Feng, Yamei Ding, Mo Xian, Xin Xu, Rubing Zhang, Guang Zhao. Production of optically pure D-lactate from glycerol by engineered Klebsiella pneumoniae strain. Bioresource Technology, 2014, 172: 269-275.
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960852414013339
2. Xinjun Feng, Liqun Jiang, Xiaojuan Han, Xiutao Liu, Zhiqiang Zhao, Huizhou Liu, Mo Xian, Guang Zhao. Production of D-lactate from glucose using Klebsiella pneumoniae mutants. Microbial Cell Factories, 2017, 16: 209.
https://microbialcellfactories.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12934-017-0822-6
3. Liqun Jiang, Nannan Wu, Anqing Zheng, Xiaobo Wang, Ming Liu, Zengli Zhao, Fang He, Haibin Li, Xinjun Feng. Effect of glycerol pretreatment on levoglucosan production from corncobs by fast pyrolysis. Polymers, 2017, 9(11): 599.
http://www.mdpi.com/2073-4360/9/11/599