研究人员先前筛选到的酵母Wickerhamiella sorbophila在混合脂肪酸甲酯中的生长比热带假丝酵母更加稳定,可以作为一株潜在的候选菌株。在本研究中,基于W. sorbophila的全基因组序列信息,研究人员首先为W. sorbophila的工业应用开发并优化了基因工程工具。为了在转化过程中增加同源重组(HR)效率,使用核糖核苷酸还原酶的抑制剂HU将酵母细胞的生长同步到细胞周期的S / G2期。通过提高重组效率,POX1和POX2基因位点的HR效率分别从56.3%和41.7%增加到97.9%。在细胞生长早期和对数生长阶段,URA3和ADE2基因的HR效率几乎为0%,通过使用HU之后分别增加到4.8%和25.6%。 研究人员使用开发的工具构建了W. sorbophila UHP4,其中β-氧化通过敲除POX1(在β-氧化中起主要作用)被完全阻断,在5L分批补料发酵中,菌株在126小时内从月桂酸甲酯产生92.5 g/L十二烷二酸(DDDA),产率为0.83 g/L/h。
图1 W. sorbophila中二羧酸生物合成途径
本研究工作证明了W. sorbophila是一种利用植物油生产DCA的重要微生物平台。 此外,通过使用开发的基因工程工具,这种新兴酵母可用于生产多种脂肪酸衍生物,例如脂肪醇,脂肪醛和ω-羟基脂肪酸等。本研究工作发表在《Biotechnology for Biofuels》上。