近日,我中心陈坚院士团队周景文教授课题组在《ACS Synthetic Biology》上发表文章“Systematic Engineering of Escherichia coli for Efficient Production of Nicotinamide Mononucleotide From Nicotinamide”。文章采用路线1,通过添加烟酰胺和葡萄糖直接生物合成NMN。作者首先对大肠杆菌进行系统改造,敲除相关NMN降解基因nadR、pncC、ushA和PRPP调控因子purR,确保大肠杆菌中烟酰胺稳定转化为NMN。接下来,作者通过对不同来源的8种NAMPT进行比较,从中确定了最佳的NAMPT(来自弧菌噬菌体KVP40),其具有最佳的从烟酰胺生产NMN 的催化活性。此外,为了增加PRPP 的供应,来自解淀粉芽孢杆菌的PRPP 合酶基因BaPRSL135I被共表达。引入 NMN外排蛋白BMPnuC后,细胞外NMN 的积累进一步增加。随后作者优化了用于NMN合成的VpNadV、BaPRSL135I和NMN外排蛋白BMpnuC的表达,用pET-28a (+)表达BaPRSL135I和VpNadV,用pCDFDuet表达BMpnuC,使得在摇瓶水平上NMN的产量达2.6 g/L。最后通过优化的补料分批生物转化工艺,在 5 L 生物反应器中25 小时内可从6.1 g/L 烟酰胺中获得16.2 g/L NMN,烟酰胺的转化率为97.0%,实现了最高滴度的NMN 生产。
综上,作者在大肠杆菌中以烟酰胺为底物,实现了NMN的最高滴度合成,并为进一步提高 NMN 及其衍生物如NR、NAD(P) +和 NAD(P)H 的生产提供了见解。