主要研究内容：
1. 在解脂耶氏酵母中构建白藜芦醇的合成途径
首先，在解脂耶氏酵母中建立虎杖苷的前体白藜芦醇的合成途径。通过在基因组中整合酪氨酸解氨酶（TAL）、4-香豆酰辅酶 A 合成酶（4CL）和白藜芦醇合成酶（ST1），使得白藜芦醇产量为100.8 mg/L。
2. 增加莽草酸途径通量和直接碳流以合成白藜芦醇
为了进一步提高白藜芦醇的产量，研究人员尝试增加莽草酸途径通量以提高前体酪氨酸合成。通过在基因组中的MHY1位点引入来自大肠杆菌的抗反馈抑制的两个酶 AroG*和TyrA *，成功地增加了莽草酸途径通量，改造后的菌株可产生146.26 mg/L的白藜芦醇和315.16 mg/L的对香豆酸。
3. 增加ST1拷贝数以提高白藜芦醇产量
4. 将碳重新分配到前体以提高白藜芦醇产量
PHK途径由磷酸酮醇酶(PK)和磷酸转乙酰酶(PTA)组成，PK可将F6P分解为E4P和Ac-P，而PTA可将Ac-P转化为乙酰辅酶A，因此PHK途径的引入不仅增加了E4P的可用性，而且增加了前体乙酰辅酶A的供应。所以研究人员引入来源于双歧杆菌的PK和枯草芽孢杆菌的PTA，最终使白藜芦醇产量达到 487.77 mg/L。
5. 在解脂耶氏酵母中从头合成虎杖苷
6. 通过敲除葡萄糖苷酶以抑制虎杖苷的水解
然而，在合成虎杖苷时，在发酵后期观察到了虎杖苷的降解和白藜芦醇的积累，降解现象可能源于解脂耶氏酵母中存在的葡萄糖苷酶。因此，研究人员筛选并鉴定了来自解脂耶氏酵母内源的葡萄糖苷酶，最终确定同时敲除EXG1和BGL2可有效抑制虎杖苷降解。由于白藜芦醇苷是糖苷类化合物，葡萄糖同时作为碳源和糖基配体，需要优化葡萄糖浓度以进一步提高产量，在YPD（100 g/L）培养基中发酵144小时后，虎杖苷的产量为6.88 g/L。
原文链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960852423005552
