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恩拉霉素国内外生产工艺及技术进展

   日期:2010-09-28     来源:网络    浏览:1111    评论:0    
核心提示:发酵法生产多肽类抗生素恩拉霉素的方法中采用链霉菌 Streptomyces sp.NJWGY3665,该菌在起始低葡萄糖浓度 (1%)发酵、生产过程中通
  
发酵法生产多肽类抗生素恩拉霉素的方法中采用链霉菌 Streptomyces sp.NJWGY3665,该菌在起始低葡萄糖浓度 (1%)发酵、生产过程中通过流加葡萄糖等营养物质,并根据发酵不同阶段对溶氧的需求差异的情况下实现了高效率的发酵,单位体积发酵液中恩拉霉素效价达 6100μg/mL。
 
 
 
链霉菌
 
Streptomyces sp.NJWGY3665菌株是从南京工业大学江浦校区土壤中分离得到。目前该链霉菌菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,本保藏中心登记入册编号是 CGMCC NO.2410,分类命名:链霉菌,菌种的拉丁学名是 Streptomyces sp.,参据的微生物(株):NJWGY3665,保藏日期是2008年 3月 21日。
 
 
 
发酵法生产多肽类抗生素恩拉霉素的方法是采取以下方式实现:
 
发酵法生产多肽类抗生素恩拉霉素的方法为:
 
 
 
(1)斜面培养:将链霉菌
 
Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖营
 
培养基中,进行斜面培养,葡萄糖营养培养基的重量百分配比为葡萄糖 0.5~ 1%、牛肉膏 0.5~1%、蛋白胨 0.5~1%、NaCl0.3~0.5%或K2HPO40.1~0.2%、琼脂 1.5~2%、水余量,pH 6.0~9.0,培养温度28~37℃,培养时间2天~6天;
 
(2)种子培养:用无菌水将斜面上培养的孢子制成单孢子悬液,并接种到50ml种子培养基中培养,种子培养基的重量百分配比为葡萄糖 1~3.0%、玉米浆 1~3%、CaCO31~2%、酵母粉 0.5%、NaCl0.1~0.8%、水余量,pH为 6.0~ 9.0,温度为 28~32℃,转速为 200rpm,培养 2天~6天;
 
(3)发酵培养:将种子液接种到发酵培养基中培养,发酵培养基的重量百
 
分配比为葡萄糖 2.0~5.0%、淀粉 0.5~2.0%、玉米浆 0.5~3.0%、酵母膏 0.1~ 0.5%、黄豆饼粉 0.5~2%、NaCl0.5~1.0%、CaCO3 1~2%、NH4Cl0.5%、磷酸二氢钾 0.2%、硫酸铵 0.3%、水余量,温度控制在 28~37℃,pH控制在 6.0~9.0,转速 180~220rpm,发酵 5~9天,得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665,采用离心分离的方法将菌丝体用甲醇或乙醇进行提取分离,再采用离子交换树脂方法进行精制分离,获得多肽类抗生素恩拉霉素。
 
采用 HPLC进行定量分析,可以得知样品中恩拉霉素的浓度。单位体积发酵液中恩拉霉素为3630μg/ml~6630μg/ml。
 
 
 
链霉菌 Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂平板上培养后,大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面,气生菌丝呈现白色至微灰色。
 
 
 
本工艺发酵法生产多肽类抗生素恩拉霉素的方法中采用链霉菌 Streptomyces sp.NJWGY3665,该菌在实现了高效率的转化,恩拉霉素产率为 6630μg/mL。链霉菌 Streptomyces sp.NJWGY3665菌株是经自主筛选分离到的一株产抗菌物质的菌株,其发酵产物恩拉霉素具有强烈的抗微生物活性,且敏感菌几乎不对恩拉霉素产生耐药性。本工艺发酵法生产多肽类抗生素恩拉霉素的方法工艺过程简单,生产成本低,单位效价高。
 
     
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