关键词:枯草芽孢杆菌;特性;作用机制;注意事项;应用现状
引言 在水产养殖中,微生态环境起着养殖生物排泄物及残饵的分解、转化、水质因子的调节与稳定等作用。它的正常与否决定着水质的优劣,进而影响养殖生物能否健康成长。我国的水产养殖多以静水为主,池塘老化严重,自净与调节能力较差,急需治理,这是预防病害的关键。
目前,相对于物理和化学方法,应用微生物治理养殖水体已成为研究的热点。枯草芽孢杆菌分解、转化和适应能力强,对养殖生物和人体无害,因而目前被大量的用于水产养殖中。
1 枯草芽孢杆菌的特性 直杆状,单个,无荚膜,能运动,芽孢呈圆柱或椭圆状,革兰阳性,严格好氧,是我国农业部正式批准使用的益生菌,具有菌种单一、对抗生素无耐药性及对水产动物无毒性(尹文林,2006)等特点。作为益生菌特性为:(1)耐酸、耐盐、耐高温(100℃)及耐挤压。(2)在小肠内不增殖,在肠道的上段迅速发展成具有新陈代谢作用的营养型细胞,参与菌群的平衡调节。(3)提高短链脂肪酸含量,降低肠道pH及氨浓度。(4)繁殖过程中产酸、酶和多种维生素。
2 枯草芽孢杆菌的作用机制 枯草芽孢杆菌在水产动物肠道的作用主要表现在以下几方面:(1)能产生抗弧菌和酵母菌的活性物质,对鱼类嗜水气单胞菌、细菌性败血病病菌、大黄鱼致病菌、中华绒螯蟹致病菌及金黄色葡萄球菌有强烈的抑制作用。(2)繁殖过程中分泌大量的蛋白酶脂肪酶和淀粉酶,能补充机体内原酶的不足,提高饲料的降解和吸收速率,促进水产动物消化。(3)大量好氧,形成肠道厌氧环境,有益于乳酸菌等有益菌增殖,完善肠道生物屏障的作用,抵抗病原菌的定植和侵害。(4)枯草芽孢杆菌细胞的主要成分葡聚糖能发挥免疫刺激物的作用,提高鱼类的非特异性免疫功能。
3 枯草芽孢杆菌的作用方式
3.1作为饲料添加剂 由于枯草芽孢杆菌能耐受饲料制作过程中的高温高压,保持良好的稳定性和生物活性,因此,当前以饲料添加剂在水产养殖中的应用较多。枯草芽孢杆菌的防病能力源于对养殖对象体内微生态环境的改善和机体免疫力的提高。当枯草芽孢杆菌被吞食人肠道后,消耗氧气,造成充满二氧化碳的厌氧环境,从而扶持和促进双歧杆菌、乳酸菌等有益菌的增殖,有益菌能与肠系膜上皮细胞紧密结合,迅速定植,形成微生物膜,构成肠道生物屏障,阻碍病菌的人侵和定植,又通过发酵作用产生大量乳酸、乙酸,降低肠内pH,维持正常的肠蠕动并使致病菌被排出体外。枯草芽孢杆菌细胞的主要成分葡聚糖,能发挥免疫刺激物的作用,提高鱼类的非特异性免疫功能。机体吞噬细胞的活性也因枯草芽孢杆菌的进人而被激活,吞噬和消化能力大大加强,从而提高机体的免疫力。饲料中添加枯草芽孢杆菌能提高南美白对虾免疫功能和抗氧化能力,从而促进其生长,适宜添加量为0.05%。饲料中添加枯草芽孢杆菌能有效地提高血细胞的吞噬活性,同时能使克氏原螯虾溶菌酶的产量提高。饲料中添加枯草芽孢杆菌后,斑节对虾的酚氧化酶的活性和抗菌活性得到了提高。
3.2作为水质改良剂 目前,在水产养殖中作为水质改良剂的主要是光合细菌。枯草芽孢杆菌能大量消耗水体中的有机质,将其分解为小分子有机酸、氨基酸及氨,改善水质,为单胞藻提供营养,还可使氨浓度降低,净化水质。在水体中使用枯草芽孢杆菌B115制剂后,对养殖水体的溶氧和pH无明显影响,但对氨氮、亚硝酸盐和硫化物均有大幅度降低。在蟹池和鱼池中分别加入枯草芽孢杆菌作为水质改良剂发现,其对池塘氨氮、亚硝酸盐氮和硫化物有明显的降解作用,最大降解峰值出现在3~4天,有效时间持续超过7天。试验表明,只有当枯草芽孢杆菌B115浓度超过1000mg/kg时,可能因为菌体耗氧及培养基在水体中的氧化作用导致鱼缺氧而死。因此,作为水质改良剂可视水质情况每7天泼洒全池1次,使用后及时开增氧机,以保证达到最好的使用效果。
4枯草芽孢杆菌在水产养殖上的应用效果
4.1虾类养殖中的应用 2002年4月本实验室在海南英州江海养殖厂进行了斑节对虾精养高位养殖池应用实验,施用枯草芽孢杆菌后,由于枯草芽孢杆菌的繁殖和代谢作用,养殖池中的有害物质——亚硝酸盐、硫化氢减少,亚硝酸盐浓度从0.0769µg/L下降到0.0599µg/L,而同期对照池亚硝酸盐浓度则从0.0677µg/L上升到0.079µg/L;硫化氢对照池浓度在0.00515-0.0246mg/L的范围内波动,而处理池硫化氢浓度10天内从0.068mg/L降到0.0109mg/L,并且开始两天内,更是骤降了0.0422mg/L之多。 衡量水质污染状况的化学耗氧量COD值明显降低,10天内COD值从投放前的9.054下降到8.222,而对照的每次测量值都高于处理池,COD值从9.072上升至9.57并且总碱度(ALK)降低,pH值也维持在适宜对虾生长的安全水平。证明枯草芽孢杆菌能够达到净化水质,优化养殖水体环境,保持养殖池微生态平衡的效果。并研究了枯草芽孢杆菌在虾塘中的消长规律,发现枯草芽孢杆菌施人养殖池后,能够很好的适应海水盐度和渗透压、温度等环境并通过自身的繁殖,使菌数逐渐增加,5-8天达到高峰。因此,投放枯草芽孢杆菌的时间间隔以一周左右为宜。
4.2 河蟹育苗中的应用 仇丽等(2001)在江苏江洋特种水产养殖场河蟹育苗阶段进行投放枯草芽孢杆菌试验:选用8m3的水泥育苗池一组,水温19-25℃。每天投喂12次,其中蛋黄、藻粉各3次,轮虫、枝角6次。对照池每天换水2次,换水量每天15%-30%,312小时共换水7倍,并且先后施用了土霉素、痢特灵、高锰酸钾。试验池312小时中投放枯草芽孢杆菌3次,每次3克,正常投饵,不换水,不用药。试验结果:对照池平均氨氮量为0.313mg/L,试验池为0.285mg/L,比对照池降低8.9%,节约用水85.7%
4.3 其他水产品种养殖中的应用 华雪铭等(2001)在基础饲料中分别添加0.1%、0.2%、0.4%的芽孢杆菌,0.3%、0.6%、1.2%的硒酵毒,0.2%+0.3%、0.2%+0.6%、0.2%+1.2%的芽孢杆菌和硒酵母混合物,投喂异育银鲫2个月,测定鱼体的生长和对病原菌嗜水气单孢菌的抗感染能力。
结果表明,添加不同浓度的芽孢杆菌对体重的增加有显著影响,其中添加0.2%的芽孢杆菌组相对增重率比对照组增加33%。添加不同浓度的硒酵母均可不同程度地促进异育银鲫生长,其相对增重率比对照组增16%-31%。不同配比的芽孢杆菌和硒酵母混合物显著性提高鱼的相对增重率,但增重效果与单一添加芽孢杆菌或硒酵母相似。饲料中单一添加芽孢杆菌或硒酵母可以极显著地提高异育银鲫对嗜水气单孢菌的抵抗能力,添加效果在各芽孢杆菌水平组无显著差异,混合添加芽孢杆菌和硒酵母也能显著增强异育银鲫对嗜水气单孢菌的抗感染能力,但添加效果不及单一芽孢杆菌。 李英涛(2002)用不同盐度的池水,添加以芽孢杆菌为主体的生物活菌素,进行褶皱臂尾轮虫培养试验,试验结果表明:投施活菌素的各试验组均能有效降低氨氮浓度,维持良好的水质环境。此种有效维持时间大约为7天,7天后需重新投人生物活菌素;生物活菌素对pH值的影响不显著。运用Logistis方程分析,生物活菌素能提高种群环境容纳量(种群增长最大值,即k值),并可预测最佳倒池时机,即达到k/2的时间。
5 使用枯草芽孢杆菌的注意事项
(1)枯草芽孢杆菌虽然能够净水防病,但它并非能防止所有病害的发生,养殖者应密切关注水体状况,以多种手段综合防治。
(2)枯草芽孢杆菌并非用的越多越好,因为它是一种好氧菌,过量使用会造成水体缺氧,引发养殖水产品因缺氧而死亡。
(3)使用枯草芽孢杆菌前应先在水中使菌体活化数小时后再泼洒,因为产品中的细胞均以芽孢状态存在,处于休眠状态,不具备代谢能力,如果直接投人会效果缓慢且不显著;经过活化的芽孢杆菌投人水体后,代谢旺盛,能在池塘中迅速增殖,分解大量有机质,效果显著。
(4)枯草芽孢杆菌不要与杀菌剂一同使用。否则枯草芽孢杆菌会被杀死,起不到净水作用。根据水体状况、养殖密度及天气情况,结合增氧设备,既能保证水体得以净化,又能保证鱼类的正常活动。