本标准的5.1、5.3和第8章条文为强制性条款,其余为推荐性条款。
本标准的附录A、附录C和附录D为规范性附录,附录B为资料性附录。
农用微生物菌剂
1 范围
本标准规定了农用微生物菌剂(即微生物接种剂)的术语和定义、产品分类、要求、试验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。
本标准适用于农用微生物菌剂类产品。
2 规范性引用文件(略)
3 术语和定义(略)
4 产品分类
产品按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型;按内含的微生物种类或功能特性可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根菌剂、生物修复菌剂等。
5 要求
5.1 菌种
生产用的微生物菌种应安全、有效。生产者应提供菌种的分类鉴定报告,包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整资料。生产者应提供菌种安全性评价资料。采用生物工程菌,应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。
5.2 产品外观(略)
5.3 产品技术指标
表1 农用微生物菌剂产品的技术指标
项 目 |
剂 型 |
|||
液 体 |
粉 剂 |
颗 粒 |
||
有效活菌数(cfu)a ,亿/g(mL) |
≥ |
2.0 |
2.0 |
1.0 |
霉菌杂菌数,个/g(mL) |
≤ |
3.0×106 |
3.0×106 |
3.0×106 |
杂菌率, % |
≤ |
10.0 |
20.0 |
30.0 |
水分,% |
≤ |
- |
35.0 |
20.0 |
细度,% |
≥ |
- |
80 |
80 |
pH值 |
|
5.0~8.0 |
5.5~8.5 |
5.5~8.5 |
保质期b,月 |
≥ |
3 |
6 |
|
a 复合菌剂,每一种有效菌的数量不得少于0.01亿/g(mL);以单一的胶质芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)制成的粉剂产品中有效活菌数不少于1.2亿/g。 b 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。 |
表2 有机物料腐熟剂产品的技术指标
项目 |
剂 型 |
|||
液 体 |
粉 剂 |
颗 粒 |
||
有效活菌数(cfu), 亿/g(mL) |
≥ |
1.0 |
0.50 |
0.50 |
纤维素酶活a,U/g(mL) |
≥ |
30.0 |
30.0 |
30.0 |
蛋白酶活b,U/g(mL) |
≥ |
15.0 |
15.0 |
15.0 |
水 分,% |
≤ |
- |
35.0 |
20.0 |
细 度,% |
≥ |
- |
70 |
70 |
pH值 |
|
5.0~8.5 |
5.5~8.5 |
5.5~8.5 |
保质期c,月 |
≥ |
3 |
6 |
|
a 以农作物秸秆类为腐熟对象测定纤维素酶活。 b 以畜禽粪便类为腐熟对象测定蛋白酶活。 c 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。 |
表3 农用微生物菌剂产品的无害化技术指标
参数 |
|
标准极限 |
粪大肠菌群数,个/g(mL) |
≤ |
100 |
蛔虫卵死亡率,% |
≥ |
95 |
砷及其化合物(以As计),mg/kg |
≤ |
75 |
镉及其化合物(以Cd计),mg/kg |
≤ |
10 |
铅及其化合物(以Pb计),mg/kg |
≤ |
100 |
铬及其化合物(以Cr计),mg/kg |
≤ |
150 |
汞及其化合物(以Hg计),mg/kg |
≤ |
5 |
6 试验方法
6.1 仪器设备(略)
6.2 试剂(略)
6.3 产品参数的检测
取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中,仔细观察样品的颜色、形状、质地。
采用平板计数法,根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。
若采用最大可能数(Most Probable Number,MPN)5管法,遵照附录C的规定。
称取样品10 g(精确到0.01 g),加入带玻璃珠的100 mL的无菌水中(液体菌剂取l0.0 mL加入90 mL的无菌水中),静置20 min,在旋转式摇床上200 r/min充分振荡30 min,即成母液菌悬液(基础液)。
用无菌移液管分别吸取5.0mL上述母液菌悬液加入45 mL无菌水中,按1:10进行系列稀释,分别得到1:1×101,1:1×102,1:1×103,1:1×104……稀释的菌悬液(每个稀释度应更换无菌移液管)。
每个样品取3个连续适宜的稀释度,用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1 mL,加至预先制备好的固体培养基平板上,分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
每一稀释度重复3次,同时以无菌水作空白对照,于适宜的条件下培养。
根据所检测菌种的技术资料,每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时,检测结果无效,应重做。
以出现20~300个菌落数的稀释度的平板为计数标准(丝状真菌为10~150个菌落数),分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度,其平均菌落数在20~300个之间时,则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度,其平均菌落数均在20~300个之间时,应按两者菌落总数之比值决定。若其比值小于等于2应计算两者的平均数;若大于2则以稀释度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式(1)或式(2)计算:
nm = kv1/(m0v2) ×10-8 …………………(1)
nv =
式中:
nm — 质量有效活菌数, 亿/g
nv — 体积有效活菌数, 亿/mL
k — 稀释倍数
v1 — 基础液体积, mL
v2 — 菌悬液加入量, mL
v0 — 样品量, mL
m0 — 样品量, g