1.7蛭弧菌在死的宿主菌中的生长特性
蛭弧菌Bd81、Bd98于加热及氯仿处理失活的宿主菌双层琼脂平板上可比在未经处理的活的宿主菌双层琼脂平板上更迅速的形成噬菌斑,后者一般需40~48h才可出现噬菌斑。在加热及氯仿处理的宿主菌双层琼脂平板上只需14h,形成噬菌斑的数目也大大增多。例如在100℃加热致死的宿主菌中Bd81增加105倍,Bd98增加约72倍,在80℃加热致死的宿主菌中Bd81增加151倍,Bd98增加73。氯仿处理致死的宿主菌上Bd81增加74倍,Bd98增加67倍。在这些宿主菌的琼脂平板中形成的噬菌斑也明显的小于在活菌平板上,形成噬菌斑的时间也较快(Bd81为28h,Bd98为36h),数量也有增加(Bd98)或没有增加。在抗生素(氯霉素、土霉素、氨苄青霉素及多粘菌素B)处理失活的宿主菌双层琼脂平板上,形成噬菌斑的时间差别不大,噬斑的数量与在活菌宿主菌双层琼脂上也不增加(Bd81)或差别不大(Bd98)。
检查了Bd81、Bd98于100℃热死宿主菌自来水培养液中生长增殖的情况。分别在活的及加热致死的宿主菌双层琼脂平板上计数噬菌斑,用活的宿主菌双层琼脂平板检查,试验组第2天(48h)蛭弧菌Bd81噬斑增加到1.1×104PFU/mL ,对照组增加至8.4×103PFU/mL ,第五天两组均达到最高,试验组为1.1×105PFU/mL,对照组为6.0×104PFU/mL,试验组为对照组的183.7%。同样,Bd98在48h试验组噬菌斑增加至6.3×104PFU/mL,对照组为6.7×103PFU/mL,第五天试验组增至9.0×104PFU/mL,对照组为4.9×104PFU/mL,前者为后者的183.7%。如培养后蛭弧菌以加热致死的宿主菌双层琼脂平板计数噬菌斑,培养48h后,试验组Bd81为3.4×106PFU/mL,对照组为4.0×105PFU/mL,第五天试验组为8.0×106PFU/mL,对照组为8.0×105PFU/mL,前者为后者的10倍。Bd98试验组48h后噬菌斑为2.1×107PFU/mL,对照组为8.0×104PFU/ml,第五天试验组为2.4×107PFU/mL,对照组为2.3×105PFU/mL,前者为后者的10.4倍。
实验结果证明,在加热致死的宿主菌上生长增殖的蛭弧菌,再接种在活的宿主菌琼脂平板上仍然恢复其生长特性和裂解的活力。
2蛭弧菌噬菌特性的研究
2.1蛭弧菌对不同科属细菌的宿主范围
从8株蛭弧菌在不同科属24株菌的琼脂平板上形成噬菌斑的能力试验中,发现蛭弧菌的宿主范围均较广,都可在自来水宿主双层平板中裂解较多不同科属的革兰阴性菌株及部分阳性菌株,于48h产生噬菌斑(表1),从宿主范围看,不同的蛭弧菌株对宿主的选择并不相同。
2.2 蛭弧菌对弧菌的裂解作用
蛭弧菌对弧菌具有较广泛的裂解范围,包括古典型霍乱弧菌,EL Tor霍乱弧菌及不凝集弧菌的大部分菌株均可被裂解。在以Bd81、Bd98两株蛭弧菌对69株弧菌的裂解试验中,其中Bd81裂解56株,占81.2%;Bd98裂解54株,占78.5%。Bd81、Bd98蛭弧菌对57株EL Tor生物型霍乱弧菌的裂解没有噬菌体型特异性选择。对高氏法噬菌体分型的1,2,3,4,5和6型菌株,非溶非复菌株及其他抗性菌株均有被裂解。
蛭弧菌Bd81、Bd98对59株霍乱弧菌的裂解同样没有血清学型特异性选择。对血清学分型的稻叶、小川型的裂解率Bd81为74.2%或89.3%。Bd98为77.4%或82.1%。