首先，我们要知道实验原理，醋酸锂转化法是利用碱性Li+改变细胞膜的通透性，促进感受态的形成使细胞易于吸收外界DNA。我们都知道凡事过犹不及，高浓度LiAc改变了酵母细胞膜结构，会对酵母细胞产生损害，因此我们要用到一种高分子聚合物--PEG，它可以在高浓度醋酸锂环境中保护细胞膜，减少醋酸锂对细胞膜结构的过度损伤，同时使质粒与细胞膜接触更紧密，促进转化。LiAc，PEG，TE等都可以在clontech公司买到，但如果你为了节省实验成本想自己配置试剂，要注意调节1.1×TE/LiAc pH到7.5，PEG/LiAc现配现用以及各试剂组分比例准确。
“替罪羊”carrier DNA
第二个要注意的问题是酵母细胞中含有DNA酶，能够降解外源DNA，因此在转化过程中我们要用到“替罪羊”carrier DNA，其为短的线形单链DNA，在转化实验中主要是保护质粒免于被DNA酶降解；另外还可能在酵母细胞摄取外源性环形质粒DNA中发挥协助作用。在每次使用前务必进行两次热变性，使可能结合的双链DNA打开，保证carrierDNA在转化实验体系中以单链形式存在。
转化效率之酵母活力
试剂问题是最基础的，相信童鞋们一般不会出错。（无菌操作问题我们就不用特异强调了）。而与转化效率有关的最重要的一个因素是酵母本身的活力。
第一，我们要用的酵母单克隆必须是新鲜的，即在平板上划线后不超过一个月。
第二，摇菌过程中要让酵母一直处在生长旺盛时期，通过测定OD600来控制细胞密度，特别是最后一次培养OD600值不超过0.5，应用对数生长期酵母进行实验（Y2H Gold)。这里需要注意的是OD值与细胞数的关系可能因酵母菌株不同而有所差异，不同分光光度计之间也可能存在差异，在实验进行前要进行校正。
转化效率之质粒DNA质量和浓度
此外，质粒DNA的质量和浓度也是影响转化效率的重要因素。转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%。共转化时，使用BD-vector与AD-vector摩尔比为2:1，转化效率最好。
酵母感受态制备完成后，要尽快用于转化，转化过程中进行42℃热激，需严格控制热激温度及时间，在热激前加入DMSO，改变细胞膜通透性提高转化率，但是DMSO对酵母细胞也是有毒害作用，要注意DMSO的使用量，并且加完后不能剧烈斡旋，需轻柔混匀。热激之后，用YPDPlus或者2XYPDA进行复苏，可以提高转化效率50-100%。
转化完成之后，在涂板时要注意，需要涂布稀释100倍的DDO，SD/-trp，SD/-leu三种板，以便万一实验出现问题进行原因排查，另外第一次进行共转实验时，强烈建议同时做阳性对照。
最后，进行培养时要注意培养箱的温度，Y2HGold酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
好了，今天小编就啰嗦到这儿，希望做酵母双杂的童鞋们实验顺利！
