质粒大全及质粒图谱

一.九种表达载体
Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, 
pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA
二.克隆载体
pTZ19R DNA
pUC57 DNA
PMD18T
PQE30
pUC18
pUC19
pTrcHisA 
pTrxFus 
pRSET-A 
pRSET-B 
pVAX1
PBR322
pbv220
pBluescript II KS (+)
L4440 
pCAMBIA-1301 
pMAL-p2X 
pGD926
三.PET系列表达载体
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET expression System 33b
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET expression Systems
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET expression Systems plus Competent Cells
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44
Protein expression ? Prokaryotic expression ? pET Vector DNA
Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits

四.PGEX系列表达载体
T EcoR?pGEX-1 I/BAP 
pGEX-2T 
pGEX-2TK 
pGEX-3X 
pGEX-4T-1 
pGEX-4T-2 
pGEX-4T-3 
pGEX-5X-1 
pGEX-5X-2 
pGEX-5X-3 
pGEX-6P-1 
pGEX-6P-2 
pGEX-6P-3 

五.PTYB system
PTYB1
PTYB2
PTYB11
PTYB12
六.真核表达载体
pCDNA3.1(-)
pCDNA3.1(+)
pPICZ alpha A 
pGAPZαA 
PYES2.0
pBI121
pEGFP-N1 
pEGFP-C1
pPIC9K 
pPIC3.5K

---

如何阅读分析质粒图谱

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素
复制起始位点Ori? 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+? ,Kan+
多?克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段
P/E? 启动子/增强子
Terms 终止信号?
加poly（A）信号? 可以起到稳定mRNA作用

二、如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸转移酶 使G418（长那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号
启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。?
增强子/沉默子－为真核?基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。
核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。?
转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。?

回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上.

三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写）
1. 什么是载体
即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。
P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA

2. 载体的分类
―――按功能分成：（1）克隆载体都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨行载体）
（2）表达载体 具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。
―――按进入受体细胞类型分：（1）原核载体 （2）真核载体 （3）穿梭载体（sbuttle vector）指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭往返两种生物之间）.
P.S. 穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子，以确保两类细胞中都能扩增。

3. 基因工程载体的3个特点：
（一）都能独立自主的复制：载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域，如MCS，插在其中的外源DNA片段，能被动的跟着载体一起复制/扩增，就像载体的正常成分一样。
（二）都能便利的加以检测：如载体的药物抗性基因，多是抗生素抗性基因，将受体细胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时，只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细胞才能存活。
（三）都能容易进入宿主细胞中去，也易从宿主细胞中分离纯化出来。

4. 载体的选择和制备：
选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：
【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：
（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意3点：
①选择合适的启动子及相应的受体菌；
②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；
③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。
选用质粒（最常用）做载体的4点要求：
①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；
②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；
④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。
无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。

 

名称	长度	抗性	特殊性能
PAO815	7709 bp	Amp	酵母表达
pAxCAwt	44741 BP	Amp	腺病毒表达
pAxcw	42410 bp	Amp	腺病毒表达
pAAV-MCS	4.7 kbp	Amp	哺乳动物细胞表达
pBacPAK8	5.5 k	Amp	杆状病毒表达
PBI121	13.0 kbp	Kan	植物细胞表达
pBV220	3665 bp	Amp	原核表达
pCAMBIA 1300			植物细胞表达
pCAMBIA 1301	11837 bp	Kan	植物细胞表达
pCAT3-Basic	4047 bp	Amp

名称	长度	抗性	特殊性能
PAO815	7709 bp	Amp	酵母表达
pAxCAwt	44741 BP	Amp	腺病毒表达
pAxcw	42410 bp	Amp	腺病毒表达
pAAV-MCS	4.7 kbp	Amp	哺乳动物细胞表达
pBacPAK8	5.5 k	Amp	杆状病毒表达
PBI121	13.0 kbp	Kan	植物细胞表达
pBV220	3665 bp	Amp	原核表达
pCAMBIA 1300			植物细胞表达
pCAMBIA 1301	11837 bp	Kan	植物细胞表达
pCAT3-Basic	4047 bp	Amp
pcDNA 3	5446 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
pcDNA 3.1(+)	5428 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
pcDNA 3.1/ mys-HisA	5494 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
pCl-neo	5472 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
pCMV-MCS	4.5 kbp	Amp	哺乳动物细胞表达
pET-3a	4640 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-11a	5677 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-15b(+)	5708 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-20b(+)	3716 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-22b(+)	5493 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-23a(+)	3666 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-23b(+)	3665 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-23c(+)	3664 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-23d(+)	3663 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-28a(+)	5369 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-28b(+)	5368 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-28c(+)	5367 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-30a(+)	5422 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-30b(+)	5421 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-30c(+)	5423 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-31b(+)	5742 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-32a(+)	5900 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-32b(+)	5899 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-32c(+)	5901 bp	Amp	大肠杆菌表达
pET-39b	6106 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-42a	5930 bp	Kan	大肠杆菌表达
pGAPZ aA	3147 bp	Zeo	酵母表达
pGBKT7	7.3 kbp	Kan	酵母表达
pGEM3Zb			原核表达
pGEM3Zf(+)			原核表达
pGEM7Zf(+)			原核表达
pGEX-2T	4969 bp	Amp	原核表达
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pGFP-N2	4732 bp	Kan	哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
pEGFP-C1	4731 bp	Kan	哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
pEGFP-C3	4727 bp	Kan	哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
pEGFP-N1	4733 bp	Kan	哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
pLEGFP-N1	6892 bp	Amp	哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
pGL3-Basic	4818 bp	Amp
pGL36
pLNCX	6620 bp	Amp	反转录病毒表达
pLNHX	5.6 kbp	Amp	反转录病毒表达
pLXSN	5.9 kbp	Amp	反转录病毒表达
pLXIN	6.1 kbp	Amp	反转录病毒表达
pMAL-p2x	6721 bp	Amp	原核融合蛋白表达
pMAL-c2x	6721 bp	Amp	原核融合蛋白表达
pPIC3.5K	9004 bp	Amp/Kan	酵母表达
pPIC9	8024 bp	Amp	酵母表达
pPIC9K	9276 bp	Amp	酵母表达
pPICZ aA	3593 bp	Zeo	酵母表达
pQBI PGK	5387 bp	Amp	哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
pQE-30	3461 bp	Amp	原核表达
pQE-9	3439 bp	Amp	原核表达
pRevTRE	6487 bp	Amp	反转录病毒表达
pSE420L	4617 bp	Amp
pTac I		Amp	原核表达
pTac I(BamH I)		Amp	原核表达
pTAL-Luc	4956 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
pTWIN1	7375 bp	Amp
pTXB1	6706 bp	Amp
pVAX1	2999 bp	Kan

名称	长度	抗性	特殊性能
PAO815	7709 bp	Amp	酵母表达
pAxCAwt	44741 BP	Amp	腺病毒表达
pAxcw	42410 bp	Amp	腺病毒表达
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pBacPAK8	5.5 k	Amp	杆状病毒表达
PBI121	13.0 kbp	Kan	植物细胞表达
pBV220	3665 bp	Amp	原核表达
pCAMBIA 1300			植物细胞表达
pCAMBIA 1301	11837 bp	Kan	植物细胞表达
pCAT3-Basic	4047 bp	Amp
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pcDNA 3.1(+)	5428 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
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pCl-neo	5472 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
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pET-23a(+)	3666 bp	Amp	大肠杆菌表达
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pET-28a(+)	5369 bp	Kan	大肠杆菌表达
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pET-39b	6106 bp	Kan	大肠杆菌表达
pET-42a	5930 bp	Kan	大肠杆菌表达
pGAPZ aA	3147 bp	Zeo	酵母表达
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pGEM3Zb			原核表达
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pTac I		Amp	原核表达
pTac I(BamH I)		Amp	原核表达
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名称	长度	抗性	特殊性能
PAO815	7709 bp	Amp	酵母表达
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pCAMBIA 1300			植物细胞表达
pCAMBIA 1301	11837 bp	Kan	植物细胞表达
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pCl-neo	5472 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
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pET-31b(+)	5742 bp	Amp	大肠杆菌表达
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pGEM3Zf(+)			原核表达
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pGL3-Basic	4818 bp	Amp
pGL36
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pQE-9	3439 bp	Amp	原核表达
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pSE420L	4617 bp	Amp
pTac I		Amp	原核表达
pTac I(BamH I)		Amp	原核表达
pTAL-Luc	4956 bp	Amp	哺乳动物细胞表达
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pVAX1	2999 bp	Kan

名称 长度 抗性 特殊性能B1WKFLmh6t
PAO815 7709 bp Amp 酵母表达
pAxCAwt 44741 BP Amp 腺病毒表达
pAxcw 42410 bp Amp 腺病毒表达

pAAV-MCS 4.7 kbp Amp 哺乳动物细胞表达◎

pBacPAK8 5.5 k Amp 杆状病毒表达PBI121 13.0 kbp Kan 植物细胞表达
pBV220 3665 bp Amp 原核表达Ko9sSXFqPD
pCAMBIA 1300 植物细胞表达Nn5389mbp3
pCAMBIA 1301 11837 bp Kan 植物细胞表达2BNzJC
pCAT3-Basic 4047 bp Amp V9uE9p0uhr
pcDNA 3 5446 bp Amp 哺乳动物细胞表达jIDsr4ydVr
pcDNA 3.1(+) 5428 bp Amp 哺乳动物细胞表达jr1D4oKaJ0
pcDNA 3.1/ mys- HisA 5494 bp Amp 哺乳动物细胞表达4yIVLyXRcL
pCl-neo 5472 bp Amp 哺乳动物细胞表达JSzAug0u2n
pCMV-MCS 4.5 kbp Amp 哺乳动物细胞表达ORTLkn0qUA
pET 4640 bp Amp 大肠杆菌表达JPh647H5rI
pET 5677 bp Amp 大肠杆菌表达t5EbDgHrFy
pET-15b(+) 5708 bp Amp 大肠杆菌表达YFb5n6tPMo
pET-20b(+) 3716 bp Amp 大肠杆菌表达zrxVbpu3NB
pET-22b(+) 5493 bp Amp 大肠杆菌表达y4pA3FoKA0
pET(+) 3666 bp Amp 大肠杆菌表达C5JuQGU8sD
pET-23b(+) 3665 bp Amp 大肠杆菌表达GF6HhcAHDN
pET(+) 3664 bp Amp 大肠杆菌表达VCRoU3e757
pET-23d(+) 3663 bp Amp 大肠杆菌表达lNwpBFkpLC
pET(+) 5369 bp Kan 大肠杆菌表达VyhOAp48Q4
pET-28b(+) 5368 bp Kan 大肠杆菌表达LkcUbjpDie
pET(+) 5367 bp Kan 大肠杆菌表达ho8VpR02fo
pET(+) 5422 bp Kan 大肠杆菌表达YpwLcC6di5
pET-30b(+) 5421 bp Kan 大肠杆菌表达OutcIb3DdI
pET(+) 5423 bp Kan 大肠杆菌表达IcaJgF7jHq
pET-31b(+) 5742 bp Amp 大肠杆菌表达UF7Y5rc7JK
pET(+) 5900 bp Amp 大肠杆菌表达atnVNXZ7AD
pET-32b(+) 5899 bp Amp 大肠杆菌表达OHy6030ZrU
pET(+) 5901 bp Amp 大肠杆菌表达DnHy
pET-39b 6106 bp Kan 大肠杆菌表达1yz7WZkIAm
pET 5930 bp Kan 大肠杆菌表达HGNkLg2DNM
pGAPZ aA 3147 bp Zeo 酵母表达GXBpZoQ6UM
pGBKT7 7.3 kbp Kan 酵母表达YBY6pwKANG
pGEM3Zb 原核表达zd23Mpz2cw
pGEM3Zf(+) 原核表达sLNDIRNqi9
pGEM7Zf(+) 原核表达d4y6echHk3
pGEX-2T 4969 bp Amp 原核表达Sa5eGB7UE8
pGEX-4T-1 4969 bp Amp 原核表达uGYIQ9w6Uy
pGFP-N2 4732 bp Kan 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达kze8ood4Jz
pEGFP-C1 4731 bp Kan 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达0QB6V7bpnG
pEGFP-C3 4727 bp Kan 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达qn5qhBDlnU
pEGFP-N1 4733 bp Kan 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达1cXk28y54H
pLEGFP-N1 6892 bp Amp 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达dDoIgYJA
pGL3-Basic 4818 bp Amp M8WA1kCeBk
pGL36 ce73RBj3Gr
pLNCX 6620 bp Amp 反转录病毒表达WMMvOBg9Pu
pLNHX 5.6 kbp Amp 反转录病毒表达fWui8gVdaO
pLXSN 5.9 kbp Amp 反转录病毒表达LvuPCpjGKj
pLXIN 6.1 kbp Amp 反转录病毒表达Xb1U1KY6qP
pMAL-p2x 6721 bp Amp 原核融合蛋白表达y96UMpwasw
pMAL-c2x 6721 bp Amp 原核融合蛋白表达uXvnBUvXaV
pPIC3.5K 9004 bp Amp/Kan 酵母表达WjQ2SerFTv
pPIC9 8024 bp Amp 酵母表达4scWVRcWjG
pPIC9K 9276 bp Amp 酵母表达Ucvour6E6K
pPICZ aA 3593 bp Zeo 酵母表达9RK46w0
pQBI PGK 5387 bp Amp 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达KKpHqh9ScC
pQE-30 3461 bp Amp 原核表达72kz4SdpEB
pQE-9 3439 bp Amp 原核表达BrkfVq7FOd
pRevTRE 6487 bp Amp 反转录病毒表达xB2P8ocvuh
pSE 4617 bp Amp GViKgREoWa
pTac I Amp 原核表达07w6QZGIrP
pTac I(BamH I) Amp 原核表达sXQ8AmWRhm
pTAL-Luc 4956 bp Amp 哺乳动物细胞表达uL8ox6xk
pTWIN1 7375 bp Amp MCfiuzXfzD
pTXB1 6706 bp Amp Bu8w5yci4h

pVAX1 2999 bp Kan◎中