采用固相萃取法和液相色谱仪对试样提取液中维生素B12，进行富集并去除部分杂质，进行液相色谱仪分析。
二、液相色谱仪检测维生素B12含量的标准溶液配制：
1、维生素B12标准储备溶液：称取维生素B12标准品10mg，精确至0.1mg，用5%乙醇溶解并定容至10ml棕色容量瓶中，混匀后冷藏保存。
2、维生素B12标准中间溶液：吸取1ml标准储备液，至25ml棕色容量瓶中，用水稀释得到维生素B12标准中间溶液，冷藏保存。
三、液相色谱仪检测维生素B12含量的试样处理：
1、提取：称取4-10g样品于50ml离心管中，加10-15ml水，混匀。超声提取10min后，再以4000r/min离心5min。吸取上清液于另一个50ml离心管中，对残渣按照上述步骤，每次加入10ml水，重复两次，合并提取液于50ml离心管中。
2、净化：向提取液中加入5%四丁基氯化铵溶液1ml、三氯甲烷约20ml，混匀后以1000r/min离心3min。将水层于水浴中蒸发至近干，残渣用乙醇溶解，重复上述步骤，重复两次。蒸干乙醇，用5ml 5%定容转至试管中。
3、固相萃取：
固相萃取柱：N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲酯平衡性固相萃取柱，60mg。3ml。
固相萃取柱先用3ml甲醇活化，再用3ml水对固相萃取柱平衡，流速为1滴/s。将净化好的试样加到固相萃取柱上，用5ml 5%乙腈作为洗脱，将杂质从固相萃取柱上淋洗下来。最后用25%乙腈溶液，将维生素B12洗脱下来，收集洗脱液0.5ml。
四、液相色谱仪检测维生素B12含量的色谱条件：
色谱柱：C18，4.6*250mm，5um
流动相：梯度洗脱
流速：1ml/min
检测波长：361nm
柱温：室温
五、液相色谱仪检测维生素B12含量的计算：
