褪黑素于1959年由Lerner等人从牛松果体中首次分离。我们来看看它在体内产生的过程：首先色氨酸被羟基化生成5-羟基色氨酸，然后脱羧成5-羟色胺（5-HT），再经过乙酰化成为N-乙酰基-5-羟基色胺，最终甲基化生成N-乙酰基5-甲氧基色胺，也就是褪黑素了，见图2。这个通路中的限速环节在于第三步的乙酰化。
研究表明褪黑素与昼夜节律（睡眠）、动物生殖以及多种疾病都相关。它高度受神经输入调节，白昼合成低，夜间合成高，并且这个规律和机体的昼夜活动是不相关的。但是短暂的夜间光照会快速抑制AANAT的活性，当环境恢复后数小时内AANAT活性就会恢复并保持其应有的高水平，直到正常的活性下降时间。 褪黑素在血液中的含量低，对其定量较难，定量方法从最初的质谱到随后的放射免疫再到近年的酶联免疫。从操作难易程度来看，酶联免疫法相对更有优势。 褪黑素，作为化学小分子，因分子量小，不具备2个抗原结合位点，所以仅与一个特异性抗体结合，适用竞争抑制法进行检测。而小分子作为半抗原不具有免疫原性，所以在制备抗体前需要对其进行抗原性改造，我们通过对吲哚基上不同位点进行修饰和载体偶联，比较其抗原性的优劣，最后选定2号碳作为修饰位点，修饰后偶联载体作为免疫原免疫动物获取抗体。该抗体的竞争抑制曲线如图3所示。
