该方法低温条件下(25-42℃)可对痕量的靶DNA片段进行特异性的扩增,在最适温度37-42℃时,扩增反应时间仅需15分钟,其低温适应性和灵敏度等方面取得了重大突破并达到国际先进水平,而且摆脱国外专利壁垒。
ERA技术在核酸检测领域开发了三大核心技术,体温扩增技术,能在恒温条件下,将痕量的核酸模板扩增到可以检出的水平;单分子荧光检测技术(SM@RT),集恒温扩增与荧光信号检测于一体,可实现扩增过程的实时检测;核酸快速释放技术,为实验节省更多的时间。
原理介绍
它通过模拟生物体遗传物质自身扩增复制的原理,通过基因工程对 重组酶 、 外切酶 、 聚合酶等多酶体系进行改造,建立特殊扩增反应体系,在37-42℃恒温条件下,可将微量DNA/RNA的特异性区段在数分钟内扩增数十亿倍。
1、在常温的环境下,重组酶可与引物DNA紧密结合,形成酶和引物的聚合体
2、当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的互补序列时, 在单链DNA结合蛋白的帮助下,打开模板 DNA的双链结构
3、在DNA聚合酶的作用下,形成新的DNA互补链,并完成扩增产物的指数级增长
应用领域
1、研究诊断领域:
针对细胞培养中的支原体污染,提供一种快速、简单、灵敏的检测方法,只需要20分钟便能得出结果
2、公共卫生领域:
针对危害公众健康的呼吸道传染性病原,肠道致病病原及生殖系统病原进行快速检测
3、食品安全领域:
针对致病微生物、动物源性成分和转基因农产品进行快速现场检测
4、农业生产领域:
针对水产、畜牧养殖和宠物中各类病原,进行早期快速检测和诊断
ERA技术有哪些优势
常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤,而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。ERA反应的最适温度在37℃-42℃之间,无需变性,在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要温控设备,RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。
而ERA检测的灵敏度很高,能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平,从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且ERA还用不着复杂的样品处理,适用于无法提取核酸的实地检测。
ERA既可以扩增DNA也可以扩增RNA,还省去了额外的cDNA合成步骤。你不仅可以对扩增产物进行终点检测,还可以对扩增过程进行实时监控,甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。