胶原酶 I II III IV四个型之间区别及用法

消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶，透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用； 胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，以胶原I为主。

胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强，容易造成平滑肌细胞损坏；

胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL  此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键，所以不光要看重量还要看每MG的活性单位.

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质，因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感，极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

中文名称： I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶

英文名称：Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

CAS号: 9001-12-1

规格：100mg, 1g ,5

产地：Worthington sigma  invitrogen

外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉；

保存：-20°C

胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制 成为200u/mL就可以了.,

胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程

准备样品：干粉，PBS缓冲液，离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。

准备工作：将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。

配制：

1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度0.25％用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS（PH到7.2左右）液中。搅拌混匀，置于4℃内12小时。

2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。

3.分装：将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至