【实验原理】
02 - +02 - + 2H+ H2 02 +02
。SOD能抑制NBT的光化还原，其抑制强度与酶活性在一定范围内成正比。
3.1.25m mol/l氯化硝基四氮唑蓝（NBT）溶液（现配）：称NBT 0.102g,用
50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液(PBS)溶解定容至100ml.
4.0.033m mol/l核黄素：称2.52mg 用PBS溶解定容至200ml（遮光保存）。
【实验步骤】
4℃下 10000r/min离心15min 上清液即为粗酶液。取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。
按下表加入试计:
| 试剂 | 用量(ml ) | 终浓度(比色时) |
|
50m mol/l (PBS)
220m mol/l Met
1.25m mol/l NBT
0.033m mol/l核黄素
酶液
总体积
|
4.05
0.3
0.3
0.3
0.05
5.0
|
13m mol/l
75µ mol/l
2.0µ mol/l
对照以缓冲液代替酶液
|
将上述试剂混匀后，1只对照烧杯至于暗处，另3只对照烧杯和样品一起置于
他各管的光密度。
步骤1的上清液经适当稀释后用考马斯亮蓝 G-250法测定蛋白含量.
【实验结果及计算】
算SOD活性：
过氧化物酶(POD)活性的测定
【实验原理】
植物体内的黄素氧化酶类代谢产物常包含H2 02 ，如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中 的葡萄糖氧化酶等。H2 02 的积累可导致破坏性的氧化作用。过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)是清除 H2 02 的重要保护酶，能将H2 02 分解为02 和H2 0, 从而使机体免受H2 02 的毒害作用。其活性与植物的抗逆性密切相关。
在H2 02 存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚。可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【试剂药品】
3.0.2% 愈创木酚 :秤0.2g愈创木酚加入pH7.0的磷酸缓冲液至 100ml
【实验步骤】
酶液的制备
离心15min取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。
启动反应，测定波长240nm处的OD降低速度。将每分钟OD减少0.01定义为1个活力单位。
在3ml的反应体系中，包括0.3% H2 02 1ml, .0.2% 愈创木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最后加入0.05ml酶液启动反应，记录470nm处OD增加速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。
4. 用考马斯亮蓝 G-250法测定蛋白含量.
【实验结果及计算】
CAT和POD的酶活性以U/mg蛋白或U/gFW表示。
