1 应用范围
Colilert大肠菌群检测技术的应用领域包括水源水、瓶装水、饮用水、畜牧用水、废水、再生水、食品水、医疗用水、地下水中总大肠菌群(TotalColi forms)、大肠杆菌(E coli)之检测。
2 原理
本方法系利用总大肠菌群(TotalColiforms)能产生β-D-galactosidase酵素分解Ortho-nitrophe nyl-β-D-galactopyranoside(ONPG)之特性,使培养液形成黄色[1];以及大肠杆菌(E coli)产生之β-glucuronidase酵素分解4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide(MUG),使培养液在波长366nm之紫外光照射之下产生荧光,来判断水样中是否含有总大肠菌群(TotalColiforms)及大肠杆菌(E coli)。
3 试剂
Colilert培养基(为美国IDEXX公司生产的系列培养基,www idexx com/water)
4 设备4 1
采样容器:使用100mL带除氯剂的无菌瓶。
4 2 培养箱:温度能保持在35±1℃者。
4 3 紫外光灯:6w、波长366nm之紫外灯(含密闭可遮光之观测箱),可作为荧光反应之观察者。
4 4 定量盘:塑料制无菌定量培养用,含51个孔穴,每一孔穴可容纳2mL的水样。
4 5 封口机:可作为51孔多管发酵法(MPN)定量盘封口。
5 Colilert培养基的主要成分
商品化的ColilertONPG-MUG培养基的所含基本成分:硫酸铵,硫酸锰,硫酸锌,硫酸镁,氯化钠,氯化钙,亚硫酸钠,两性激B(AmphoritericinB),Orthonitrophenyl-β-D-galactosidase(ONPG),4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide(MUG),Solanium萃取物,钠盐,N-2-Hydroxyethylpipera zine-N1-2-ethanesulphonicacid
6 步骤
6 1 阳性/阴性反应测试(Presence/AbsenceTest,P/A)以100mL之无菌瓶量取100mL之水样,加入2 7±0 5g之MMO-MUG培养基粉末,混摇均匀使之完全溶解后,置入35±1℃的培养箱内培养24小时。
6 2 51孔定量盘式多管发酵法(Multi-wellFer mentationTechnique)
6 2 1 以100mL之无菌血清瓶量取100mL之水样,加入2 7±0 5g之MMO-MUG培养基粉末,混摇均匀使之完全溶解。6 2 2 将前述1之100mL水样全部倒入51孔之无菌定量盘内,以手轻拍定量盘赶除孔穴内之气泡,然后以封口机封口。置于35±1℃之培养箱中培养24小时。
7 结果处理
7 1 阳性/阴性反应
7 1 1 经24小时培养之后如果水样颜色变成黄色,判断为阳性反应表示水中含有总大肠菌群(To talColiforms)。
7 1 2 将经24小时培养之后的水样在暗处以波长366nm之紫外光灯照射,如果有蓝色的荧光产生则表示水中含有大肠杆菌(E coli)。7 2 51孔定量盘式多管发酵法
7 2 1 将培养24小时之后的定量盘取出观察,如果孔穴内之水样变成黄色则表示该孔穴中含有总大肠菌群(TotalColiforms)。7 2 2 计算有黄色反应之孔穴数,使用MPN(mostprobablenumber,稀释培养计数)表51孔多管发酵法之数据对照表查出其代表之总大肠菌群(TotalColiforms)最大可能数(MPN)。其结果以MPN/100mL表示之。
7 2 3 将培养24小时之后的定量盘在暗处以波长366nm之紫外光灯照射,如果有蓝色的荧光产生则表示该孔穴含有大肠杆菌(E coli)。7 2 4 计算有荧光反应之孔穴数,使用MPM表对照51孔多管发酵法数据对照表查出其代表之大肠杆菌(E coli)最大可能数。其结果以MPN/100mL表示之。
8 Colilert在中国大陆的使用
Colilert大肠菌群检测技术已经在中国大陆的厦门市环境监测中心站、珠海特区环境监测中心站、北京市环境监测中心站、上海市环境监测中心站得到使用。
9 Colilert世界各国及地方政府实验室认可
Colilert大肠菌群检测技术已经在阿根廷、澳大利亚、巴西、加拿大、智利、哥伦比亚、日本、墨西哥、马来西亚、新西兰、新加坡、台湾、澳门、英国、美国、爱尔兰、冰岛、南非、巴拿马、挪威、南朝鲜、德国、捷克等国家及地方政府实验室认可使用。
10 Colilert得到世界各组织机构认可
Colilert大肠菌群检测技术已经得到APHA、AWWA、WEF、AOAC、IBWA、EBWA、WHO认可使用。
11 技术讨论
检查水的微生物污染是一个关系到人体健康的重要问题。目前在监测中,人们使用两种普遍接受的方法:多管发酵(MTF)和膜过滤(MF)[2]。两种方法均用于对次级指示菌群,即总大肠菌群(TotalColiforms)进行计数。当前的这些细菌测试方法时间较长,通常为2-5天。而且,对测试结果进行解释与人的主观判断有关,测试步骤费时、费力,并且测试易受非大肠菌群、异养细菌的干扰。
Colilert系统是在大肠菌群测试上的一个突破。使用该系统可在18-24小时或更短时间内同时检测、识别和确认总大肠菌(TotalColiforms)和大肠杆菌(E coli)数。Colilert系统可用于“最大可能数”(MPN)和“存在或不存在”(P/A)测试。
Colilert系统读数清晰易读,灵敏度为1MPN/100ml,可在实验室和户外使用。
用Colilert系统进行测试只需单次接种,操作时间不超过2分钟。可在24小时或更短时间内获得结论性的结果,无需确认性测试或再次培养。
使用该技术可通过简单的颜色反应来同时检测,总大肠菌群(TotalColiforms)通过被培养样品中的黄色来识别,而大肠杆菌(E coli)通过在紫外光下观察到的荧光来确认。
