均匀设计方法是一种新的试验设计方法,是将数论和多元统计相结合的产物,它适用于多因素多水平的试验设计。以往对抗生素发酵配方的考察多采用正交设计方法,它所需试验次数至少为n2(n为水平数),在进行多水平的试验时,其工作量很大。而采用均匀设计所需试验次数只是n次,既避免了大工作量,又可利用电子计算机方便、快速、准确地得到定量的信息。是目前制药及其它行业考察工艺条件的一个行之有效的方法。
根据文献调研及预试验结果,确定考察的因素及其范围如下:
A:KNO3(%)* 0.01—0.05
B:(NH4)2SO4(%) 0.01—0.05
C:CaCO3(%) 0.2—0.6
D:玉米粉(%) 1.0一2.0
E:通氨量(m1/30ml) 0.6一1.0
F: 黄豆饼粉(%) 1.5一3.5
* 注:%=g/100ml medium
注:通氨时间为24,36和48h
将A,B,C,D,E,F六因素的考察范围分成3个水平,并分别循环3次拟合成10水平,列入表1内。
表1 因素水平表
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 | |
A |
0.01 |
0.03 |
0.05 |
0.01 |
0.03 |
0.05 |
0.01 |
0.03 |
0.05 |
0.01 |
B |
0.01 |
0.03 |
0.05 |
0.01 |
0.03 |
0.05 |
0.01 |
0.03 |
0.05 |
0.01 |
C |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.2 |
D |
1.0 |
1.5 |
2.0 |
1.0 |
1.5 |
2.0 |
1.0 |
1.5 |
2.0 |
1.0 |
E |
0.6 |
0.8 |
1.0 |
0.6 |
0.8 |
1.0 |
0.6 |
0.8 |
1.0 |
0.6 |
F |
1.5 |
2.5 |
3.5 |
1.5 |
2.5 |
3.5 |
1.5 |
2.5 |
3.5 |
1.5 |
选择U11(1110)表,根据其使用表的规定,选取其中的1,2,3,5,7,10列,同时去掉最后一行,组成U10(106)表。把A,B,C,D,E和F六因素分别放在U10(106)表的6列上面,将对应的各因素的各水平填人表内,试验方案就安排好了,如表2所示。
表2 U10(106)试验方案及结果
A |
B |
C |
D** |
E |
F |
结果* 相对值 | |
1 |
1(0.01) |
2(0.03) |
3(0.6) |
5(2.0) |
7(0.6) |
10(1.5) |
1.001 |
2 |
2(0.03) |
4(0.01) |
6(0.6) |
10(1.0) |
3(1.0) |
9(3.5) |
0.941 |
3 |
3(0.05) |
6(0.05) |
9(0.6) |
4(1.5) |
10(0.6) |
8(2.5) |
1.013 |
4 |
4(0.01) |
8(0.03) |
1(0.2) |
9(1.0) |
6(1.0) |
7(1.5) |
0.946 |
5 |
5(0.03) |
10(0.01) |
4(0.2) |
3(1.0) |
2(0.8) |
6(3.5) |
1.178 |
6 |
6(0.05) |
1(0.01) |
7(0.2) |
8(2.0) |
9(1.0) |
5(2.5) |
0.999 |
7 |
7(0.01) |
3(0.05) |
10(0.2) |
2(2.0) |
5(0.8) |
4(1.5) |
1.078 |
8 |
8(0.03) |
5(0.03) |
2(0.4) |
7(1.5) |
1(0.6) |
3(3.5) |
1.178 |
9 |
9(0.05) |
7(0.01) |
5(0.4) |
1(1.5) |
8(0.8) |
2(2.5) |
1.107 |
10 |
10(0.01) |
9(0.05) |
8(0.4) |
6(1.0) |
4(0.6) |
1(1.5) |
0.969 |
对照号 |
1.000 |
* 注:结果为三批平均值;
** 注:D的水平经过调整。
按照表2一8一13中安排的条件安排试验,将每个试验号的结果分别填入表2一8一13后面的结果栏目内。
将表2一8一13中各因素的各水平对结果进行逐步回归处理。得回归方程式如下:
y=1.49+0.94A一2.76B一0.40C+0.033D一0.51E十0.044F (2—8一11)
R=0.9885 F=21.33 S=0.0248 N-10
查表得=8.94 F> F检验通过(α=0.05)。
分析上述方程,可以看出:A,D,F项前面的系数均为正值;B,C,E项前的系数为负值。因此,若要使y(单位相对效价)最大,在考察范围内A,D,F应取最大值;B,C,E应取最小值。即优化条件为:A=0.05,B=0.01,C=02,D=2.0,E=0.6,F=3.5。代入上式,得:=1.200。即计算的优化号的单位相对效价为1.200。其区间估计为y=士Uα·S,α=0.05时,查表得Uα=1.96。代入上式,得:y=1.200士0.048。即在优化条件下安排试验,优化号的单位相对效价应在1.152一1.248之间。
按优化条件配制发酵培养基,进行发酵试验,优化号的单位相对效价实际值为1.177。在预测范围之内,发酵单位效价比对照组提高了17.7%。