蛋白胨是抗生素产生菌发酵生长必不可少的一种营养氮源。不同种类的蛋白胨对微生物的菌丝生长和抗生素的发酵效价以及组份有很大的影响。目前,国内抗生素发酵所用的蛋白胨主要是用鱼粉、猪肉、牛肉等制成的。为了探索新的蛋白胨来源,我们在小诺霉素产生菌的发酵中试用了蚕蛹蛋白胨,同时与鱼蛋白胨作比较,得到的试验结果表明蚕蛹蛋白胨完全适合于该抗生素的发酵生产。
1 材料与方法
1.1 菌种棘孢小单孢菌JSW-920。
1.2 培养基和培养条件
发酵培养基(%):淀粉1.0,蛋白胨0.2(蚕蛹蛋白胨,江苏如东县生物制品厂;鱼蛋白胨,上海东海制药厂),玉米粉1.5,豆饼粉1.0,硝酸钾0.05,碳酸钙0.5,氯化钴4mg/L,葡萄糖0.5。
培养条件:150L发酵罐,120℃灭菌30min,接种后35℃培养120h。
1.3 抗生素效价和组份检定测定菌为枯草芽孢杆菌。
测定培养基(%):蛋白胨0.5,牛肉膏0.3,酵母浸膏0.1,琼脂1.3,用0.033mol/LpH7.5磷酸缓冲液配制(上下层相同)。测定方法为二剂量法。 组份检定:采用硅胶G薄层测定发酵液中活性物质的组份。
溶剂系统:氯仿∶甲醇∶浓氨水=1∶3∶2(v/v),生物显影或茚三酮显迹。
2 结果与讨论
经150L发酵罐比较蚕蛹蛋白胨与鱼蛋白胨的发酵试验,结果在理化分析、抗生素产生菌的菌丝生长、发酵的生物效价,以及最后的硅胶薄板层析,都说明蚕蛹蛋白胨与鱼蛋白胨在小诺霉素发酵上无明显差异。
蚕蛹蛋白胨与鱼蛋白胨都较易溶解且不结块;溶质透明度两者相差无几;色泽上鱼蛋白胨比蚕蛹蛋白胨略淡;蚕蛹蛋白胨pH略低,在含0.2%的发酵培养中,其pH为6.0左右,而鱼蛋白胨pH为6.8左右;两者都易潮解。用于抗生素产生菌发酵培养3d后镜检,两种蛋白胨的菌丝生长速度一样,即菌丝染色深浅、形态一致,说明蚕蛹蛋白胨是菌体生长理想的营养氮源之一。发酵结束后,测定生物效价,结果列于表1。
从表1可以看出,蚕蛹蛋白胨的发酵生物效价比鱼蛋白胨的稍高,表明蚕蛹蛋白胨的可利用性。
小诺霉素发酵液中主要有Cla与C2b两个组份,现生产中主要是获得尽可能多的有效成份C2b。发酵液按材料与方法中的条件在硅胶薄板层析(图1),结果用蚕蛹蛋白胨的C2b含45%,用鱼蛋白胨的C2b含48%左右。
从组份分析看,也说明蚕蛹蛋白适用于小诺霉素的发酵生产。
