文哲(延边春雷生物药业有限公司，吉林延吉 133000) 收稿日期：2004—03—12
作者简介：文哲(1957一)，男，朝鲜族，工程师。产品：获国家AA级绿色食品生产资料[sSz一0102010706AA]
摘要：探讨从多抗霉素染茵罐批中分离抗杂菌高产菌株的方法。经分离选育出抗杂菌高产株211 、221 两株。通过20吨级发酵罐实践表明：211 、221菌株在正常罐批的发酵单位比对照分别提高12％和33％，在染菌罐批的发酵单位比对照分别提高14％和29％。
关键词：多抗霉素；染菌罐；抗杂菌高产菌株；分离
中图分类号：TQ455．5 文献标识码：A 文章编号：1008—9632(2004)05一OO36—02
我公司多抗霉素生产菌株的筛选主要用斜面孢子的物理或化学因子诱变与自然分离相结合的方法，但该方法往往出现下面三个问题：(1)摇瓶试验时效果好，而应用于生产罐时却达不到予期的效果，这是因为该菌株的遗传特性适于摇瓶条件而不适应于生产工艺条件的缘故。(2)新菌株的遗传特性不稳定，致使在发酵生产过程中出现分离现象，造成发酵单位高低不等的波动。(3)发酵罐一旦染菌发酵单位明显下降，甚至出现倒罐现象。为了克服上述问题，于2003年5月，在染芽孢杆菌的169～304罐发酵液中分离选育出211 、221 菌株，该两株菌株在摇瓶和生产罐发酵中表现良好，不仅抗杂菌同时提高了发酵单位。实践证明，从染菌罐批中进行分离也可作为选育菌株的行之有效的方法。曾有报道发酵罐中分离高产菌株的方法，但国内还没有从多抗霉素染菌罐批中分离高产菌株的报道。
1 材料与方法
1．1 菌株
金色产色链霉菌(Streptomyces aur eochromoge nes)4896变异株7 。
1．2 培养基
1.2.1 斜面培养基(％)；麦芽糖：0.5,玉米面：0.5,酵母膏:0.4，琼脂：2.0,蒸馏水配制,pH6.8。
1.2.2 母瓶培养基(％)；黄豆饼粉：1.0，玉米粉：1.0，葡萄糖：1．0，KH2P04：0．1，NaC1：0．1，CaC03：0．3，蒸馏水配制，pH6．5。
1．2．3 发酵培养(％)；玉米粉：1．5，豆饼粉：2．0，饴糖：2．0，KH2P04：O．1，NaCI：0．1，CaC03：O．3，自来水配制，pH6．5。
1．3 培养条件
1．3．1 斜面：在无菌室内用接种环取少量砂土孢子涂于斜面，于26℃恒温培养lO天。
1．3．2 母瓶：在无菌室内取培养好的斜面孢子接人母瓶中，于28~C回转式摇床振荡培养48h。
1．3．3 发酵：取培养好的母瓶液5．O％ ～10％接人发酵液中，于28℃恒温培养120h。
1．4 效价测定方法
用国际通用的生物测定法(管碟法)，测定指示菌为烟草赤星菌。
1．5 分离方法
取染菌罐批发酵液，按常规方法进行分离。
2 结果与讨论
2．1 菌株分离
取培养90h染菌发酵液，用过滤吸管过滤后，稀释成l0-5～lO-7，涂于分离培养基(同斜面培养基)，
于26℃恒温培养ll天，挑取290个单菌落接斜面。
2．2 初筛结果
将290支长好的斜面孢子接人发酵瓶，培养120h进行效价测定。根据斜面生长情况及抑菌圈大小选
出9个菌株，做进一步复筛。
2．3 复筛结果
初筛的9个菌株和对照菌株，再次在28℃摇瓶培养48h，每个菌株接入5个发酵瓶培养120h进行效价测定，获得两株抑菌圈直径大于对照直径的菌株。211 、221 其斜面孢子丰厚、灰色、草帽型。将211 、221 菌分别接种于发酵培养基，进行摇瓶振荡发酵实验。结果表明该两株效价分别比对照(7 菌株)提高9％和17％ 。
2．4 生产罐发酵结果
211 、221 菌株筛选自生产罐批中，再应用到生产罐中，呈现了其特性与工艺条件相适应的优点，主要是抗杂菌，菌丝生长快，发酵起步单位高，平均发酵单位增长速度保持了最高罐批的水平，从而提高了平均发酵单位。
2．4．1 正常罐批发酵单位增长率对比
新选育出的211 、221 和生产菌株(出发菌株)7 对比。
裹1 20吨级发酵罐
2．4．2 染菌罐批发酵单位增长率对比
2．4．3 2003年1月 2004年1月份多抗霉素生产经济效果对比。2003年ll、12月份，2004年1月份，仅三个月总产量比2003年1～5月份五个月的总产量超过12．3％，月产量翻番，为公司创出了较好的经济效益，这样好的经济效益来之于多方面，其中两个菌株(211 、221 )作用是主要因素之一。
裹3
3 讨论
3．1 从生产染菌罐批分离得211 、221 菌株，具有斜面孢子丰厚、灰色、抗染菌、菌丝生长快、发酵单位增长快等优点，由此法选出的菌种特性与本公司生产工艺条件相符合，从而发挥了菌种的生产潜力。
3．2 由于是在已含有相当浓度的多抗霉素培养液中分离，符合文献中强调的耐性菌株定向选育的要求，实际上可以看成是定向选育性菌株的一种方法。
3．3 211 菌株和221 菌株是在芽孢杆菌污染的发酵环境和错综复杂的生化反应过程中发生自然变异的优异菌株，其遗传特性和稳定性方面的探讨工作还在进行。
