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使用木霉菌提纯葡聚糖酶

   日期:2011-01-12     来源:发酵工业网    作者:发酵网    浏览:814    评论:0    
  

β-D-葡聚糖是一种高效生物应答物(BRM)。其在免疫促进、抗肿瘤及预防糖尿病方面早已得到广泛认可。我国啤酒工业每年产生大约4×105吨废酵母,已有不少研究对其开展了回收蛋白质、核酸、维生素及其他可溶性营养物(用作添加剂)的实验,但对提取酵母β-葡聚糖的研究不多。这些残渣要么被廉价售作饲料,要么当垃圾处理,造成了环境污染。因此,提纯酵母β-葡聚糖的研究意义重大。

β-1,3-葡聚糖不溶于水、酸、碱以及醇和醚等,在实际使用中广受限制。Bao等使用化学修饰法提高了β-1,3-葡聚糖的溶解性。但该法过于剧烈,其生物活性也降低了,化学残留与污染也成问题。β-1,3-葡聚糖酶可温和地修饰β-1,3-葡聚糖,并保持其生物活性,使其溶于水及其他溶剂,因此,酶法降解β-1,3-葡聚糖在技术上和生物学方面都具有重大意义。同时,不同来源的β-葡聚糖酶已被证实具有不同活性。胞外葡聚糖酶已成功地从真菌如Cladorrhinumfoecundissimum,Talaromycesemersonii和Rhizopusoryzae中提取。

粗酶提取的方法为:取固态发酵培养基,加入NaAc缓冲液于室温下浸提,用沃特曼滤纸过滤残余菌丝和颗粒。滤液在高速冷冻离心机中离心,上清液即为β-1,3-葡聚糖粗酶。

粗酶纯化方法为:粗酶液中添加(NH4)2SO4,在冷冻沉降机中离心,取沉淀溶于NaAc缓冲液,装透析袋透析。使用乙二醇(PEG600)脱水浓缩沉淀,DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B柱层析,洗脱液分别收集并脱水浓缩。

经SDS-PAGE分析,该酶分子量近似54.6KD。酶最适反应pH为5.0,最适温度为50℃。在pH3.0-5.0、温度30℃-70℃之间酶活相对稳定。Fe3+、Mg2+、Mn2+以及Cu2+对该酶有抑制作用,Zn2+、Cav和Fe2+则有激活作用。底物选择性研究表明,该酶为β-1,3、β-1,4-葡聚糖酶,可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。

 
     
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